富勒醇對(duì)血管生成的作用機(jī)制研究.pdf

1、研究背景:腫瘤血管生成與腫瘤生長(zhǎng)、轉(zhuǎn)移密切相關(guān)?？寡苌芍委煶蔀槎喾N實(shí)體腫瘤治療中的有效方案。富勒醇C60(OH)22是一種低細(xì)胞毒性納米材料,體內(nèi)研究顯示其具有抗腫瘤作用,機(jī)制包括免疫調(diào)節(jié)和抗腫瘤血管生成等,但它抗血管生成的作用機(jī)制尚不明確。既往研究顯示C60衍生物可以調(diào)控HDAC,而HDAC抑制劑通過(guò)下調(diào)HIF-1α、VEGF的表達(dá)從而抑制腫瘤血管生成。本課題進(jìn)一步研究C60(OH)22是否通過(guò)調(diào)控HDAC而影響血管生成。

2、　　方法:通過(guò)檢測(cè)細(xì)胞活性(MTT法)來(lái)反映C60(OH)22對(duì)永生化人臍靜脈血管內(nèi)皮細(xì)胞(HUVEC)增殖的影響。通過(guò)細(xì)胞侵襲實(shí)驗(yàn)(Transwell法)和網(wǎng)格形成實(shí)驗(yàn)來(lái)檢測(cè)C60(OH)22對(duì)體外HUVEC血管生成的影響。通過(guò)檢測(cè)C60(OH)22處理后細(xì)胞內(nèi)活性氧(ROS)以及HDAC1、HDAC2、HIF-1α、VEGF、RECK的表達(dá)和MMP2、MMP9酶活性的變化,并進(jìn)一步通過(guò)干擾HDAC1或HDAC2的表達(dá)后檢測(cè)體外HUV

3、EC介導(dǎo)的血管生成、細(xì)胞內(nèi)ROS以及HIF-1α、VEGF、、RECK表達(dá)和MMP2、MMP9酶活性的變化,來(lái)研究C60(OH)22對(duì)血管生成的作用機(jī)制。通過(guò)裸鼠的Matrigel plug模型,進(jìn)一步研究C60(OH)22對(duì)體內(nèi)血管生成及對(duì)HDAC1、HDAC2、HIF-1α、VEGF、MMP2、MMP9、RECK表達(dá)水平的影響。
　　結(jié)果:C60(OH)22能夠抑制血管內(nèi)皮細(xì)胞侵襲轉(zhuǎn)移和網(wǎng)格形成,但不影響細(xì)胞活性。C60(OH

4、)22能夠降低細(xì)胞內(nèi)ROS以及HDAC1、HDAC2、HIF-1α、VEGF的表達(dá),并抑制MMP2、MMP9酶活性,但增加了RECK的表達(dá)。siRNA干擾HDAC1或HDAC2的表達(dá),抑制了血管內(nèi)皮細(xì)胞侵襲和網(wǎng)格形成,降低了細(xì)胞內(nèi)ROS水平以及HIF-1α、VEGF的表達(dá),并抑制了MMP2、MMP9酶活性,但增加了RECK的表達(dá)。體內(nèi)實(shí)驗(yàn)顯示C60(OH)22處理后Matrigel plug中血管數(shù)明顯減少,HDAC1、HDAC2、HI