白藜蘆醇對血管性癡呆的神經(jīng)保護(hù)作用及其機(jī)制研究.pdf

1、研究背景:
　　血管性癡呆是由一系列腦血管因素導(dǎo)致的腦組織損害引起的以認(rèn)知功能障礙為特征的一種癡呆綜合癥。隨著全世界人口老齡化發(fā)展，血管性癡呆的患病人數(shù)逐年增多，目前在我國國內(nèi)血管性癡呆患者在老年癡呆群體中占據(jù)較高份額，其生活質(zhì)量差，家庭負(fù)擔(dān)、社會負(fù)擔(dān)均較為沉重，因此該病的防治工作不僅受到整個醫(yī)學(xué)領(lǐng)域的矚目，更引起了整個社會的密切關(guān)注，但截至目前，其發(fā)病機(jī)制仍未可知，這方面的研究成為了目前研究的熱點。白藜蘆醇是從中國傳統(tǒng)中藥虎杖根

2、莖中被提取的天然化學(xué)物質(zhì)。其是具有抗氧化活性的天然物質(zhì)，生物活性廣泛，在調(diào)節(jié)血脂、止咳平喘、抗氧化、抗腫瘤進(jìn)展、對抗細(xì)菌上均發(fā)揮重要作用，此外其還可以對肝臟及心血管系統(tǒng)形成保護(hù)作用，備受神經(jīng)系統(tǒng)及心腦疾病領(lǐng)域的關(guān)注。目前對于白藜蘆醇血管和神經(jīng)保護(hù)作用的研究，成為神經(jīng)科一個新的熱點，但目前對白藜蘆醇的研究多集中在神經(jīng)系統(tǒng)變性性疾病及急性腦血管病方面，在癡呆方面主要著重于在阿爾茨海默病方面的研究。對于血管性癡呆方面的研究尚不是很多。另外如前

3、所述白藜蘆醇是一種天然的抗氧化劑，其抗氧化應(yīng)激的作用得到了眾多學(xué)者的認(rèn)可，但其在抗凋亡及膽堿能系統(tǒng)是否同樣發(fā)揮一定的保護(hù)作用，還不得而知。所以在本研究中，擬通過不同的方面探討白藜蘆醇對血管性癡呆的血管及神經(jīng)保護(hù)作用。該研究共包括以下四部分內(nèi)容:
　　第一部分白藜蘆醇預(yù)處理對PC12細(xì)胞氧糖剝奪損傷模型氧化應(yīng)激的影響
　　目的:
　　通過對PC12細(xì)胞進(jìn)行體外培養(yǎng)，剝奪氧糖建立相應(yīng)的損傷模型，就白藜蘆醇預(yù)處理后的細(xì)胞活力

4、、乳酸脫氫酶、超氧化物歧化酶、丙二醛的影響，從而通過體外實驗探討白藜蘆醇對血管性癡呆的保護(hù)作用。
　　方法:
　　體外培養(yǎng)PC12細(xì)胞，不同濃度(10μmol/L、20 mol/L、40μmol/L、60μmol/L)白藜蘆醇預(yù)處理PC12細(xì)胞24小時后，應(yīng)用化學(xué)方法建立細(xì)胞氧糖剝奪損傷模型。復(fù)氧24小時后，通過四甲基偶氮哇藍(lán)法觀察不同濃度白藜蘆醇對細(xì)胞活力的影響;同時檢測乳酸脫氫酶活性，超氧化物歧化酶活性及丙二醛含量。

5、r>　　結(jié)果:
　　模型組較對照組的PC12細(xì)胞活力明顯下降(P＜0.05)，10μmol/L、20μmol/L白藜蘆醇組可明顯升高PC12細(xì)胞細(xì)胞活力(P＜0.05)，且兩組之間存在顯著性差異(P＜0.05);而40μmol/L組與模型組之間無顯著性差異(P＞0.05)，而60μmol/L組與模型組相比細(xì)胞活力有所下降(P＜0.05)。與對照組相比，模型組LDH的釋放量顯著增加(P＜0.05)，與模型組相比，10μmol/L、2

6、0μmol/L白藜蘆醇組LDH的釋放量均有所減少(P＜0.05)，且兩組之間存在顯著性差異(P＜0.05)，40μmol/L白藜蘆醇組與模型組之間無顯著性差異(P＞0.05)，60μmol/L白藜蘆醇組與模型組相比LDH釋放量增加，存在顯著性差異(P＜0.05)。與正常對照組相比，模型組SOD活性顯著下降(P＜0.05)，與模型組相比，10μmol/L、20μmol/L白藜蘆醇組SOD活性均有所升高(P＜0.05)，且兩組之間存在顯著性

7、差異（P＜0.05），40μmol/L白藜蘆醇組與模型組之間無顯著性差異(P＞0.05)，60μmol/L白藜蘆醇組與模型組相比SOD活性有所下降，存在顯著性差異(P＜0.05)。與正常對照組相比，模型組MDA水平顯著升高(P＜0.05)，與模型組相比，10μmol/L、20μmol/L白藜蘆醇組MDA活性均有所下降(P＜0.05)，且兩組之間存在顯著性差異(P＜0.05);40μmol/L白藜蘆醇組與模型組之間無顯著性差異(P＞0.0

8、5)，60μmol/L白藜蘆醇組與模型組相比MDA水平有所升高，存在顯著性差異(P＜0.05)。
　　結(jié)論:
　　10μmol/L、20μmol/L白藜蘆醇預(yù)處理可以提高PC12細(xì)胞氧糖剝奪損傷模型的細(xì)胞活力，且具有一定的濃度依賴性，而40μmol/L白藜蘆醇對該模型細(xì)胞活力無明顯影響，60μmol/L白藜蘆醇可以降低該模型細(xì)胞活力;其具體保護(hù)機(jī)制可能與減少LDH釋放、升高SOD活性、降低MDA活性相關(guān)。
　　第二部分

9、白藜蘆醇對血管性癡呆大鼠模型行為學(xué)的影響
　　目的:
　　采用持久雙側(cè)頸總動脈結(jié)扎術(shù)造成血管性癡呆大鼠模型，觀察白藜蘆醇對血管性癡呆大鼠模型學(xué)習(xí)記憶能力的影響。
　　方法:
　　選取健康Wistar大鼠（月齡為12～14月），體重300～400g，隨機(jī)分為對照組、模型組、白藜蘆醇對照組及白藜蘆醇治療組，采用持久雙側(cè)頸總動脈結(jié)扎術(shù)造成血管性癡呆大鼠模型，白藜蘆醇對照組及白藜蘆醇治療組于術(shù)后8周開始以白藜蘆醇（25m

10、g.kg-1）每天灌胃，對照組和模型組以同等量的0.5 g/L羧甲基纖維素鈉灌胃，連續(xù)4周。采用Morris水迷宮實驗定位航行實驗和空間搜索實驗衡量大鼠學(xué)習(xí)記憶水平。
　　結(jié)果:
　　訓(xùn)練第1～3天，模型組動物的平均上臺潛伏期以及上臺前游泳距離與其他組無明顯差別;而且隨著訓(xùn)練次數(shù)的增加，到達(dá)平臺的潛伏期及游泳距離不斷縮短。但到第4天，模型組大鼠的上臺潛伏期和游泳距離明顯高于對照組和白藜蘆醇治療組(P＜0.01)。實驗第5天撤

11、除平臺，模型組動物在平臺所在象限（第Ⅱ象限）中游泳的時間百分比和距離百分比明顯低于對照組(P＜0.05)和白藜蘆醇治療組(P＜0.05)。
　　結(jié)論:
　　白藜蘆醇可以提高血管性癡呆大鼠模型的學(xué)習(xí)記憶能力。驗;空間搜索實驗
　　第三部分白藜蘆醇對VD大鼠模型氧化應(yīng)激及膽堿能系統(tǒng)的影響
　　目的:
　　我們擬觀察白藜蘆醇對血管性癡呆大鼠模型海馬和皮層組織丙二醛、超氧化物歧化酶及谷胱甘肽，以及乙酰膽堿酯酶、膽堿

12、乙酰轉(zhuǎn)移酶的影響。
　　方法:
　　第二部分動物模型在完成行為學(xué)檢測后，斷頭取腦，在冰盒上剝離皮層與海馬組織，測定各組大鼠腦皮層、海馬組織丙二醛、超氧化物歧化酶及谷胱甘肽活性的變化;及乙酰膽堿酯酶、膽堿乙酰轉(zhuǎn)移酶活性的變化。
　　結(jié)果:
　　與對照組相比，模型組大鼠腦皮層、海馬組織內(nèi)丙二醛的活性明顯升高(P＜0.05)、超氧化物歧化酶及谷胱甘肽的活性明顯降低(P＜0.05);與模型組相比，白藜蘆醇治療組大鼠腦皮層

13、、海馬組織內(nèi)丙二醛的活性明顯降低(P＜0.05)、超氧化物歧化酶及谷胱甘肽的活性明顯升高(P＜0.05)。與空白對照組相比，模型組大鼠腦皮層、海馬組織內(nèi)乙膽堿酯酶活性明顯升高(P＜0.05)、膽堿乙酰轉(zhuǎn)移酶活性明顯降低(P＜0.05);與模型組相比，白藜蘆醇治療組大鼠腦皮層、海馬組織內(nèi)乙膽堿酯酶明顯減低（P＜0.05），膽堿乙酰轉(zhuǎn)移酶活性明顯升高(P＜0.05)。
　　結(jié)論:
　　白藜蘆醇可以抑制血管性癡呆大鼠模型的氧化應(yīng)激

14、反應(yīng);白藜蘆醇可以刺激血管性癡呆大鼠模型的膽堿能系統(tǒng)。
　　第四部分白藜蘆醇對血管性癡呆大鼠模型凋亡的影響
　　目的:
　　我們擬觀察白藜蘆醇對血管性癡呆大鼠模型凋亡相關(guān)蛋白的影響，從而探討白藜蘆醇對血管性癡呆的保護(hù)機(jī)制。
　　方法:
　　第二部分動物模型在完成行為學(xué)檢測后，斷頭取腦，在冰盒上剝離皮層與海馬組織，采取Westen-blot的方法檢測Bax、Bcl-2、Caspase-3、PARP表達(dá)的影響。

15、
　　結(jié)果:
　　與正常組相比，模型組的Bax的表達(dá)明顯上升，而Bcl-2的表達(dá)明顯下降，Bax/Bcl-2的比率也明顯升高(P＜0.05)。與模型組相比，白藜蘆醇組Bax的表達(dá)明顯下降，而Bcl-2的表達(dá)明顯上升，Bax/Bcl-2的表達(dá)明顯下降(P＜0.05)。與正常組相比，模型組的caspase-3的表達(dá)明顯上升(P＜0.05)。與模型組相比，白藜蘆醇組caspase-3的表達(dá)明顯下降(P＜0.05)。與正常組相比，模