茄科蔬菜立枯絲核菌的遺傳分化及分子檢測(cè).pdf

1、2005-2006年,從山東泰安、壽光及陜西周至、太白等地采集辣椒和番茄立枯病、莖腐病和根腐病病株及病株周圍土壤標(biāo)本65份,分離、純化得到39個(gè)立枯絲核菌菌株。 菌絲融合群鑒定和5.8S rDNA-ITS區(qū)序列分析結(jié)果表明：36個(gè)菌株(占菌株總數(shù)的92.3％)屬于立枯絲核菌的AG-4融合群,僅有3個(gè)菌株屬于AG-5融合群(占分離菌株總數(shù)的7.7％);隸屬AG-4融合群的菌株又進(jìn)一步分為AG-4-HG-I和AG-4-HG-Ⅲ融合亞

2、群,隸屬此兩個(gè)亞群的供試菌株與此兩個(gè)亞群的標(biāo)準(zhǔn)菌株相比,其5.8S rDNA-ITS區(qū)序列一致性達(dá)99％-100％。本研究還進(jìn)一步證明AG-4-HG-I群的菌株為茄科蔬菜根部病害的優(yōu)勢(shì)致病群,占分離菌株總數(shù)的79.5％:AG-4-HG-Ⅲ群菌株占分離菌株總數(shù)的12.8％,居分離菌株總數(shù)的第二位。此亞群為國內(nèi)首次在茄科蔬菜上分離得到。 利用10個(gè)隨機(jī)引物,對(duì)21個(gè)代表菌株進(jìn)行RAPD分析,結(jié)果表明,10個(gè)引物共獲得179個(gè)DNA多

3、態(tài)性片段,多態(tài)性檢測(cè)率為100％；以遺傳距離0.43為或與閾值時(shí),將供試的21個(gè)菌株分為2個(gè)RAPD組,以遺傳距離0.34為閡值時(shí),屬于AG-4融合群的菌株又可以分為2個(gè)RAPD組：隸屬同一融合亞群的不同菌株間也存在豐富的遺傳分化。說明RAPD分析結(jié)果能夠反映茄科蔬菜絲核菌不同菌株間豐富的遺傳分化現(xiàn)象。 利用番茄對(duì)分離得到的39個(gè)絲核菌菌株進(jìn)行了致病性測(cè)定,結(jié)果表明：隸屬不同融合群的不同菌株其致病性強(qiáng)弱存在明顯差異。同屬于AG-

4、4融合群的36個(gè)菌株也具有明顯的致病力分化現(xiàn)象?？傮w看來,屬于AG-4-HG-I融合亞群的菌株致病力較強(qiáng),屬于AG-4-HG-Ⅲ融合亞群的菌株的致病力相對(duì)較弱。將AG-4-HG-I融合亞群各供試菌株的致病力分化結(jié)果與RAPD分析結(jié)果進(jìn)行對(duì)比分析發(fā)現(xiàn),菌株的RAPD分組(RG)與致病性分組(VG)無明顯相關(guān)性。由此可見,RAPD分析雖然能夠比較全面的反映供試立枯絲核菌菌株間的遺傳分化,但是,對(duì)于探尋菌株間致病力的分化并不是一個(gè)有效手段。

5、 依據(jù)供試菌株rDNA-ITS區(qū)序列分析結(jié)果,針對(duì)AG-4融合群設(shè)計(jì)一對(duì)特異性引物,該引物特異性檢測(cè)結(jié)果表明,只有屬于AG-4融合群的絲核菌菌株擴(kuò)增到一個(gè)約500bp的片段,屬于其它融合群的絲核菌菌株及其它土傳真菌病原如茄腐鐮刀菌和終極腐霉菌都沒有擴(kuò)增到任何片段；利用該對(duì)引物從番茄立枯病罹病植株的發(fā)病部位成功檢測(cè)到一個(gè)約500bp的片段,而從健康植株中沒有檢測(cè)到任何片段。此特異性引物為茄科蔬菜絲核菌病害的早期、快速診斷奠定了良好的