立枯絲核菌DsRNA多樣性及其與致病力關(guān)系研究.pdf

1、關(guān)于學(xué)位論文原創(chuàng)性和使用授權(quán)的聲明本人所呈交的學(xué)位論文，是在導(dǎo)師指導(dǎo)下，獨(dú)立進(jìn)行科學(xué)研究所取得的成果。對(duì)在論文研究期間給予指導(dǎo)、幫助和做出重要貢獻(xiàn)的個(gè)人或集體，均在文中明確說(shuō)明。本聲明的法律責(zé)任由本人承擔(dān)。本人完全了解山東農(nóng)業(yè)大學(xué)有關(guān)保留和使用學(xué)位論文的規(guī)定，同意學(xué)校保留和按要求向國(guó)家有關(guān)部門(mén)或機(jī)構(gòu)送交論文紙質(zhì)本和電子版，允許論文被查閱和借閱。本人授權(quán)山東農(nóng)業(yè)大學(xué)可以將本學(xué)位論文的全部或部分內(nèi)容編入有關(guān)數(shù)據(jù)庫(kù)進(jìn)行檢索，可以采用影印、縮印

2、或其他復(fù)制手段保存論文和匯編本學(xué)位論文，同時(shí)授權(quán)中國(guó)科學(xué)技術(shù)信息研究所將本學(xué)位論文收錄到< 中國(guó)學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù)》，并向社會(huì)公眾提供信息服務(wù)。保密論文在解密后應(yīng)遵守此規(guī)定。論文作者簽名：導(dǎo)師簽名：日2 材料方法????????????????????????????????l 82 ．1 絲核菌菌株的來(lái)源與保存????????????????????????1 82 ．1 ．1 絲核菌菌株來(lái)源??????????????????

3、??????????1 82 ．1 ．2 絲核菌菌株的保存???????????????????????????2 02 ．2 培養(yǎng)基的制備?????????????????????????????2 l2 ．2 ．1P D A 培養(yǎng)基的制備???????????????????????????2 l2 ．2 ．2L B 培養(yǎng)基的制備???????????????????????????2 l2 ．3 供試菌株的培養(yǎng)??????????

4、??????????????????．．2 l2 ．4d s R N A 的提取??????????????????????????????????????．2 l2 ．4 ．1 實(shí)驗(yàn)器材????????????????．．．．??????????????2 l2 ．4 ．2 提取試劑??????????????????????????????．2 l2 ．4 ．3d s R N A 的粗提取步驟????????????????????

5、??????2 22 ．4 ．4d s l 塒A 的純化????????????????????????????．2 32 ．5d s I ⅢA 序列分析?????????????????????????????．2 32 ．5 ．1 供試菌株及試劑???????????????????????????。2 32 ．5 ．2d s R N A 的部分e D N A 克隆???????????????????????。2 42 ．5 ．3

6、 特異性擴(kuò)增片段的回收????????????????????????一2 62 ．5 ．4 回收產(chǎn)物的檢測(cè)?????????????????????????????2 62 ．5 ．5 特異性擴(kuò)增片段克隆???????????????????????????2 62 ．5 ．5 ．1 建立克隆反應(yīng)體系??????????????????????????～2 62 ．5 ．5 ．2 轉(zhuǎn)化?????????????????????????

7、????????????????。2 62 ．5 ．5 ．3 單克隆的檢測(cè)?????????????????????????????2 72 ．5 ．6 序列測(cè)定及分析?????????????????．．．．??????????2 72 ．6d s R N A 多樣性研究????????????????????????????2 72 ．7 拮抗木霉菌株對(duì)A G l ．I A 、A G ．3 、A G _ 4 群菌株的生防效果測(cè)定??

8、??????2 72 ．7 ．1 平板對(duì)峙培養(yǎng)???????????? ?????????????2 73 結(jié)果與分析????????????????????．．．．??????????2 83 ．1 立枯絲核菌A G l - I A 群菌株d s R N A 條帶出現(xiàn)時(shí)閥的檢測(cè)???????????2 83 ．2 絲核菌d s R N A 多樣性分析?????????～??????????????．2 93 ．2 ．1 玉米紋枯病菌不