鋰-匹羅卡品致大鼠癲癇持續(xù)狀態(tài)后腦內(nèi)神經(jīng)元的凋亡觀察.pdf

1、中國(guó)醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文鋰匹羅卡品致大鼠癲癇持續(xù)狀態(tài)后腦內(nèi)神經(jīng)元的凋亡觀察姓名：魏昕申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：碩士專(zhuān)業(yè)：神經(jīng)病學(xué)指導(dǎo)教師：高旭光2001.4.1一~~~~~~.........供，體重180一2208。隨機(jī)分為10組，每組5只。A組:正常對(duì)照組B組:SE1小時(shí)組C組:SE2小時(shí)組DEFGHIJ分別為SE后2h4h6h8h1天、3天、5天、7天組。用銼一匹羅卡品誘發(fā)大鼠SE。大鼠腹腔注射氯化鏗3mqkg16小時(shí)后給予腹腔注射匹羅卡品4

2、0m擴(kuò)kg澳化甲基阿托品1mgkg誘發(fā)大鼠SE.SE后2h給予大鼠腹腔注射安定10mgkg、苯巴比妥鈉25mgkg及阿托品1mgkg終止實(shí)驗(yàn)。各組動(dòng)物達(dá)到預(yù)定時(shí)點(diǎn)后，給予10%水合氯醛35mgkg麻醉，剪開(kāi)胸腔，充分暴露心臟，左心室插管，剪開(kāi)右心耳，先以肝素化生理鹽水100m1快速灌流沖洗血液后，以4%多聚甲醛一0.1M磷酸鹽緩沖液(PH7.4)500m1灌流固定，固定充分后，開(kāi)顱取全腦，置相同固定液中后固定。將固定好的標(biāo)本置于40C3

3、0%蔗糖溶液中浸泡24小時(shí)，自額極5nmi處開(kāi)始切取2mm厚的冠狀腦片，人恒冷切片機(jī)切成6Lm厚的切片，附于鉻明礬明膠處理過(guò)的載玻片上，每只大鼠取2張切片進(jìn)行TUNLE染色。TUNEL試劑盒為武漢博士德生物工程有限公司產(chǎn)品。TUNEL染色的步驟為3%過(guò)氧化氫處理10分鐘，消除內(nèi)原性過(guò)氧化氫酶活性，蒸餾水沖洗3次，每次2分鐘滴加PBS1100新鮮稀釋ProteinaseK37℃消化2分鐘，蒸餾水沖洗3次，每次2分鐘滴加標(biāo)記緩沖液稀釋的末端

4、脫氧核糖核酸(TdT)和DIG一dUTP20W1片，37℃標(biāo)記2小時(shí)，PBS洗滌3次，每次2分鐘滴加封閉液50PI片，室溫30分鐘，甩掉封閉液滴加封閉液1100稀釋生物素化抗地高辛抗體，50w1片，37℃反應(yīng)30分鐘，PBS沖洗3次，每次2分鐘，滴加PBS1100稀釋SABC37℃反應(yīng)30分鐘，PBS沖洗4次，每次5分鐘滴加DAB溶液染色，觀察顯色情況，自來(lái)水終止反應(yīng)，蘇木素復(fù)染3分鐘，梯度酒精脫水，二甲苯透明，中性樹(shù)膠封片。陰性對(duì)照: