馬傳染性貧血病毒核殼蛋白的表達(dá)純化和性質(zhì)研究.pdf

1、馬傳染性貧血病毒（equine infectious anemia virus, EIAV）作為逆轉(zhuǎn)錄病毒中的慢病毒家族中的一員，具有結(jié)構(gòu)簡單，與人免疫缺陷病毒基因組同源性高、形態(tài)和生活周期相似等特點(diǎn)，因此可以作為研究慢病毒的理想模型。Gag蛋白由病毒 gag基因編碼，先翻譯成多聚蛋白前體，在病毒成熟過程中被病毒編碼的蛋白酶裂解為基質(zhì)蛋白、衣殼蛋白、核殼蛋白（nucleocapside protein, NCp11）和C端小肽p9。在病

2、毒顆粒的組裝中Gag與RNA之間特異的與非特異的相互結(jié)合起著至關(guān)重要的作用。NCp11不但賦予了Gag蛋白與核酸作用的能力，而且在病毒顆粒的裝配中介導(dǎo)了RNA的選擇性包裝和再折疊。因此對(duì)NCp11的研究可以更為清楚地了解病毒顆粒的包裝原理以及相關(guān)機(jī)制。
　　本文首先利用鎳親和層析的方法從大腸桿菌中純化了帶His標(biāo)簽的NCp11， Gag以及Gag加工過程中的中間產(chǎn)物NCp11-p9，經(jīng)SDS-PAGE檢測，得到了純度較高的重組蛋白

3、。隨后的瓊脂糖凝膠電泳發(fā)現(xiàn)，經(jīng)鎳親和層析純化的NCp11、NCp11-p9和Gag均為蛋白－核酸復(fù)合物，而用同樣方法純化的p9中則檢測不到核酸信號(hào)。對(duì)所純化的三種蛋白－核酸復(fù)合物進(jìn)行了性質(zhì)分析，發(fā)現(xiàn)它們對(duì)RNase A消化和脫氧膽酸鈉處理敏感，而對(duì)熱處理和Tween20、Triton X-100和NP40處理不敏感。然后，本文制備了不含核酸的NCp11、NCp11-p9和Gag蛋白，證實(shí)它們能以序列非特異性的方式在體外結(jié)合 RNA和長度