馬傳染性貧血病毒弱毒疫株S2基因在體內(nèi)變異分析.pdf

1、馬傳染性貧血病毒是(EIAV)逆轉(zhuǎn)錄病毒科慢病毒屬成員之一,可使馬屬動(dòng)物患馬傳染性貧血,表現(xiàn)為持續(xù)感染、反復(fù)發(fā)熱和貧血等癥狀,該疾病是馬屬動(dòng)物主要的傳染病之一。二十世紀(jì)七十年代,我國科學(xué)家成功研制了馬傳染性貧血病毒驢白細(xì)胞弱毒疫苗EIAVDLV121。該疫苗具有良好的安全性與誘導(dǎo)免疫保護(hù)效果,是世界上第一個(gè)成功應(yīng)用的慢病毒疫苗。而關(guān)于弱毒疫苗的致弱機(jī)理和免疫機(jī)制尚不清楚,圍繞該弱毒疫苗我們從分子水平和免疫水平開展了一系列的研究。

2、　　 EIAV其基因組全長(zhǎng)約8.2kb,除含有三個(gè)主要結(jié)構(gòu)基因gag、pol和env外,還有三個(gè)小開放閱讀框架tat(S1)、S2和rev(S3)。S2基因是決定馬傳染性貧血病毒的毒力以及在體內(nèi)復(fù)制能力的重要基因之一,在弱毒疫苗體外致弱的過程中,S2基因是變異較大的基因之一,由此推測(cè)弱毒疫苗的弱化與S2基因在體外傳代過程中的變異相關(guān)。目前已有對(duì)弱毒疫苗gp90基因在體內(nèi)變異的報(bào)道,而關(guān)于其S2基因在體內(nèi)的變異尚無研究。為研究馬傳染性貧

3、血病毒驢白細(xì)胞弱毒疫苗株EIAVDLV121的S2基因在馬體內(nèi)變異的規(guī)律,本研究選用6匹EIAV抗血清陰性馬匹,其中4匹(＃1、#2、#5、#8)接種EIAVDLV121,2匹健康對(duì)照。接種后在5個(gè)月內(nèi)監(jiān)測(cè)馬體溫,定期采集血樣,檢測(cè)血小板數(shù)量,應(yīng)用real-time RTPCR方法檢測(cè)感染馬體內(nèi)的病毒載量,并通過RT-PCR方法獲得病毒S2基因在感染馬體內(nèi)不同時(shí)期的基因序列,并對(duì)所得序列進(jìn)行生物信息學(xué)分析。
　　 研究結(jié)果顯示,

4、EIAVDLV121接種馬未出現(xiàn)馬傳染性貧血體征,外周血病毒載量一直維持在1×106copies/ml以下,血小板數(shù)量和馬體溫在正常范圍內(nèi)波動(dòng);EIAVDLV121接入馬匹后,其S2基因在體內(nèi)不斷發(fā)生變異,對(duì)于#1馬,S2基因在體內(nèi)的氨基酸變異位點(diǎn)主要集中在第17、37、39、41、51和55位,#2馬主要集中在第17、22、37、39、41、51和55位,#5馬主要集中在第6、18、22、37、39、41、51和55位,撐8馬主要集中

5、在第37、39、41、51和55位。其中,#1馬第3、7、8檢測(cè)時(shí)間點(diǎn)的序列和#8馬的第1檢測(cè)時(shí)間點(diǎn)的序列變?yōu)橛H本致病性強(qiáng)毒EIAVLN40的S2基因型,與致病性強(qiáng)毒親緣關(guān)系最近,核苷酸平均差異率分別為0.4％、0.5％、0.3％和0.5％,氨基酸平均差異率分別為0.9％、1.3％、0.8％和1.3％,但未引起病毒毒力的改變。研究結(jié)果進(jìn)一步表明EIAV驢白細(xì)胞弱毒疫苗EIAVDLV121具有良好的安全性,其S2基因在馬體內(nèi)并不保守,S2