IL-17對腎臟缺血再灌注損傷中的作用及機理.pdf

1、缺血再灌注損傷(ischemia—reperfusion injury,IRI)是臨床上常見的病理生理過程,是引起自身腎臟和移植腎臟發(fā)生急性腎衰竭的基本因素。炎癥是其普遍特征。多個炎性介質(zhì)參與了缺血再灌注損傷的炎癥反應(yīng),例如,白細(xì)胞、白細(xì)胞黏附分子、細(xì)胞因子以及趨化因子和補體。
　　 IL-17除了在自身免疫疾病方面起重要作用外,它在缺血再灌注損傷所起的作用也越來越被人們所重視。IL-17具有前炎性因子的屬性,其主要的生物學(xué)功能

2、是促進炎癥反應(yīng),可以誘導(dǎo)靶細(xì)胞分泌各種炎癥因子、趨化因子和含金屬的蛋白酶的表達,同時引起中性粒細(xì)胞募集、激活、滲出。與類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、哮喘、多發(fā)性硬化癥、銀屑病以及移植排斥反應(yīng)密切相關(guān)。
　　 目的:探討IL-17在腎臟缺血再灌注損傷中的作用及機理,為將來臨床治療有關(guān)疾病供新的治療策略。
　　 方法:1 C57BL/6雄性小鼠40只,6—8周齡,隨機分為2組。假手術(shù)組(n=20):小鼠僅暴露腹腔游離腎蒂,30min后關(guān)閉

3、腹腔。腎臟IRI組(n=20):采用100g壓力無創(chuàng)血管夾夾閉雙側(cè)腎蒂30min后去除,恢復(fù)血流。于腎臟IRI手術(shù)再灌注后3h,6h,12h,24h收集小鼠血漿及腎臟標(biāo)本,采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)方法檢測不同時間點小鼠血漿及腎臟組織中IL-17的含量。
　　 2 C57BL/6雄性小鼠56只,6—8周齡,隨機分為7組,每組8只。(1)假手術(shù)組(SHAM組)(2)腎臟IRI組:腎臟IRI再灌注后24h取材(3)IgG抗體

4、+腎臟IRI組:腎臟手術(shù)前18h靜脈注射50mg/kg的IgG2a抗體(4)IL-17抗體+腎臟IRI組:腎臟手術(shù)前18h,靜脈注射100μg的IL-17抗體(5)IL-6抗體+腎臟IRI組:腎臟手術(shù)前18h,靜脈注射80μg的IL-6抗體(6)IL-10抗體+腎臟IRI組:腎臟手術(shù)前18h,靜脈注射100μg的IL-10抗體(7)TGF—β抗體+腎臟IRI組:腎臟手術(shù)前18h,靜脈注射100μg的TGF—β抗體。小鼠在腎臟缺血再灌注后

5、24h,收集血漿及腎臟樣本。采用全自動生化儀檢測各組小鼠反應(yīng)腎功能的主要指標(biāo)——血漿中肌酐(Cr)和尿素氮(BUN)的變化情況。采用常規(guī)HE染色觀察各組小鼠腎臟組織病理損害情況；應(yīng)用MPO活力測定試劑盒檢測各組小鼠腎臟組織中中性粒細(xì)胞募集情況；應(yīng)用ELISA分析各組小鼠腎臟組織中IL—17、IL-6、IL-10、TGF—β的變化情況。
　　 結(jié)果:1腎臟缺血再灌注損傷后小鼠血漿及腎臟組織中IL-17的水平明顯增加,以再灌注后24

6、h水平最高。
　　 2 HE染色的結(jié)果顯示:與假手術(shù)組相比,小鼠腎臟IRI后腎臟組織出現(xiàn)明顯的病理損傷,腎小管壞死率明顯增加(P<0.01)。小鼠腎臟IRI之前靜脈給予抗IL-17抗體、抗IL-6抗體阻斷后,腎臟病理損傷較靜脈給予IgG抗體對照組的小鼠明顯減輕,腎小管壞死率亦明顯降低(P<0.01)。相反,給予IL-10抗體阻斷小鼠腎臟病理損傷則明顯加重,腎小管壞死率明顯增加(P<0.01)。給予TGF—β抗體阻斷的IRI小鼠與

7、IgG抗體處理組小鼠相比腎臟病理變化無明顯統(tǒng)計學(xué)差異(P>0.05)。
　　 3與假手術(shù)組相比,腎臟IRI后24h小鼠血漿中Cr、BUN的含量明顯升高(P<0.01),提示腎功能受損。給予抗IL-17抗體、抗IL-6抗體阻斷后,小鼠血漿中的Cr、BUN的水平顯著降低(P<0.01)。抗IL-10抗體阻斷的腎臟IRI小鼠血漿中的BUN、Cr的水平較IgG抗體處理的腎臟IRI小鼠相比則顯著增加(P<0.01,P<0.05)。而抗TG

8、F—β抗體與IgG抗體處理腎臟IRI對照組相比BUN、Cr變化則無明顯的統(tǒng)計學(xué)差異(P>0.05)。
　　 4腎臟IRI能夠顯著提高小鼠腎臟組織MPO的活性,提示中性粒細(xì)胞募集增加。給予抗IL-17抗體、抗IL-6抗體阻斷后MPO活性顯著降低(P<0.01)；給予抗IL-10抗體阻斷后小鼠腎臟中MPO的活性則顯著增加(P<0.05),給予抗TGF—β抗體阻斷后MPO的活性與對照組相比無統(tǒng)計學(xué)差異(P>0.05)。
　　

9、5與假手術(shù)組相比,腎臟IRI小鼠腎臟組織中IL-17、IL-6、IL-10及TGF—β的水平均明顯升高(P<0.01)。應(yīng)用抗IL-17抗體、抗IL-6抗體,腎臟IRI小鼠腎組織中IL-17,IL-6的水平較對照IgG抗體處理組顯著降低(P<0.01),而IL-10和TGF—β的水平顯著增加(P<0.01)。應(yīng)用抗IL-10抗體,IRI小鼠腎臟中IL-17、IL-6的水平則顯著升高(P<0.01),而IL-10和TGF—β的水平顯著降低

10、(P<0.01)；應(yīng)用抗TGF—β抗體,小鼠腎組織中IL-17,IL-10及TGF—β的水平顯著降低((P<0.05,P<0.01),而IL-6的水平顯著增加(P<0.05)。
　　 結(jié)論:1腎臟缺血再灌注損傷能增加血漿及腎臟組織中IL-17的水平。
　　 2阻斷IL-17及促進IL-17分泌的IL-6,能夠降低小鼠腎臟內(nèi)IL-17的水平,可以減少腎臟組織中中性粒細(xì)胞募集,減輕腎臟病理損害,提高腎功能。相反,阻斷抗炎因子