腎臟缺血再灌注中足細胞損傷機制的研究.pdf

1、目的: 通過觀察腎臟缺血再灌注中血管緊張素II(AngII)、足細胞形態(tài)學及其相關蛋白分子nephrin、podocin表達變化，探討AngII在腎臟缺血再灌注足細胞損傷中的作用及其可能機制，為其預防和治療提供新的靶點。 方法： (1)取健康雄性SD大鼠，通過夾閉雙側腎動脈制作腎臟缺血模型，60分鐘后恢復腎臟血流，并于再灌注30分鐘，1小時，3小時，6小時，12小時，24小時后分別處死動物，苦昧酸法檢測血清肌酐、

2、ELISA法檢測血清及腎組織中AngII含量，并行光鏡及電鏡觀察腎組織形態(tài)學損傷。 (2)根據(jù)電鏡結果在足細胞損傷最嚴重時間點加用AngII的1型受體阻斷劑(ARB)氯沙坦灌胃治療，檢測。腎功能、電鏡觀察腎組織足細胞損傷、免疫熒光及Westernblot檢測腎組織nephrin、podocin表達，同假手術組，缺血組，缺血再灌注組比較，觀察上述指標變化。 (3)體外培養(yǎng)人腎小球足細胞，觀察其生長特點并經(jīng)間接免疫熒光法檢測

3、細胞上nephrin、podocin的表達。通過在培養(yǎng)箱中通入高濃度氮氣制作細胞缺氧復氧模型，ELISA法檢測細胞上清液中AngII含量變化。 (4)模擬缺血再灌注模型體內(nèi)環(huán)境變化，直接在足細胞培養(yǎng)基中加入AngII刺激，并分別給予ARB及蛋白激酶C抑制劑(PKCI)干預，觀察各組細胞形態(tài)學改變，Westernblot檢測足細胞PKC活性變化，流式細胞儀檢測細胞nephrin、podocin表達。 結論: 腎臟缺