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文檔簡介
1、目的:該實(shí)驗(yàn)通過建立大鼠腎臟缺血再灌注模型,觀察缺血再灌注致急性腎損傷后大鼠尿液白細(xì)胞介素18(interleukin 18,IL-18)的水平及變化的特點(diǎn),目的是為急性腎損傷病人早期的臨床診斷提供科學(xué)的實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
方法:
1.動(dòng)物分組將50只成年健康雄性Sprague-Dawley(SD)大鼠隨機(jī)分為假手術(shù)組(S組,25只)和模型組(M組,25只),每組又分為2h、6h、12h、24h及48h五個(gè)亞組,每亞組5只大
2、鼠。
2.動(dòng)物模型的建立實(shí)驗(yàn)前禁食12小時(shí),自由飲水,稱取并記錄各組大鼠體重。用20%烏拉坦腹腔注射麻醉,模型組大鼠取腹正中一長約3-4cm切口,鈍性解剖分離腎臟包膜,充分游離雙側(cè)腎動(dòng)脈,然后用無創(chuàng)動(dòng)脈夾完全夾閉之,隨后腎臟由紅潤迅速變?yōu)樯n白。阻斷雙側(cè)腎動(dòng)脈30min后松開動(dòng)脈夾以恢復(fù)腎臟灌注,5分鐘內(nèi)腎臟顏色由暗紅色逐漸變紅潤,說明再灌注成功,隨即縫合切口(整個(gè)手術(shù)過程中大鼠體溫始終保持在37℃)。對(duì)照組大鼠僅游離雙側(cè)腎動(dòng)脈
3、,不夾閉即關(guān)腹。
3.取材分別于各時(shí)間點(diǎn)用20%烏拉坦腹腔注射麻醉,打開腹腔,經(jīng)下腔靜脈采血約5mL和膀胱穿刺收集尿液約0.3mL,分別置于離心管中離心15分鐘(3000r/min)、10分鐘(3000r/min)后留取標(biāo)本,置于-70℃冰箱凍存待測。緊接著處死大鼠,解剖摘除雙腎,觀察腎臟色澤及大小,并將其縱行解剖,經(jīng)鹽水沖洗后放置于10%甲醛溶液中進(jìn)行固定,備行石蠟切片。
4.觀察指標(biāo)ELISA法檢測尿液IL-18
4、、二乙酰肟法測定血尿素氮(BUN),苦味酸法測定血清肌酐(SCr)。石蠟切片經(jīng)蘇木素-伊紅(HE)染色后于光鏡下觀察腎組織病理形態(tài)學(xué)改變。
結(jié)果:
1、尿液IL-18、血SCr、BUN檢測結(jié)果:M組尿IL-18于再灌注損傷后6h開始升高,12h達(dá)高峰(p<0.05),48h仍高于假手術(shù)組(p<0.05);尿素氮于再灌注損傷后6h升高,48h達(dá)高峰(p<0.01);而血肌酐則于再灌注損傷后48h才顯著升高(p<0.05
5、)。S組各時(shí)間點(diǎn)尿IL-18、血SCr、BUN差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p>0.05)。
2、腎組織病理改變:
(1)肉眼觀察:S組腎臟外觀正常,縱向剖開后顏色紅潤。M組見腎臟呈暗紅色,體積增大,部分表面可見散在小片狀出血,縱向剖開后腎皮質(zhì)顏色略白,髓質(zhì)呈暗紅色。
?。?)光鏡觀察:S組腎臟組織結(jié)構(gòu)未見異常。M組受損腎小管上皮細(xì)胞則可見普遍水腫,管腔明顯擴(kuò)張、刷狀緣消失,另有較少量上皮細(xì)胞脫落、變性、壞死,在管腔內(nèi)可
6、看到壞死脫落的細(xì)胞碎屑;至12h時(shí)可見間質(zhì)水腫壓迫致管腔明顯狹窄,蛋白管型于6h出現(xiàn)。腎小球無明顯病理改變。
結(jié)論:
1、IRI后,血BUN水平于6h開始升高,隨再灌注時(shí)間的延長,其水平亦呈上升趨勢;SCr水平升高較晚,于損傷后48h才顯著升高。
2、IRI后后腎臟病理改變表現(xiàn)為腎小管及腎間質(zhì)受到損傷,和急性腎損傷的病理改變特征相吻合。
3、IRI后,尿IL-18的水平于6h開始升高,12h達(dá)高峰
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