大鼠腎臟缺血再灌注損傷尿IL-18的水平及意義.pdf

1、目的：該實驗通過建立大鼠腎臟缺血再灌注模型，觀察缺血再灌注致急性腎損傷后大鼠尿液白細胞介素18（interleukin 18,IL-18）的水平及變化的特點，目的是為急性腎損傷病人早期的臨床診斷提供科學的實驗依據(jù)。
　　方法：
　　1.動物分組將50只成年健康雄性Sprague-Dawley（SD）大鼠隨機分為假手術(shù)組(S組，25只)和模型組(M組，25只)，每組又分為2h、6h、12h、24h及48h五個亞組，每亞組5只大

2、鼠。
　　2.動物模型的建立實驗前禁食12小時，自由飲水，稱取并記錄各組大鼠體重。用20％烏拉坦腹腔注射麻醉，模型組大鼠取腹正中一長約3-4cm切口，鈍性解剖分離腎臟包膜，充分游離雙側(cè)腎動脈，然后用無創(chuàng)動脈夾完全夾閉之，隨后腎臟由紅潤迅速變?yōu)樯n白。阻斷雙側(cè)腎動脈30min后松開動脈夾以恢復腎臟灌注，5分鐘內(nèi)腎臟顏色由暗紅色逐漸變紅潤，說明再灌注成功，隨即縫合切口（整個手術(shù)過程中大鼠體溫始終保持在37℃）。對照組大鼠僅游離雙側(cè)腎動脈

3、，不夾閉即關(guān)腹。
　　3.取材分別于各時間點用20%烏拉坦腹腔注射麻醉，打開腹腔，經(jīng)下腔靜脈采血約5mL和膀胱穿刺收集尿液約0.3mL，分別置于離心管中離心15分鐘（3000r/min）、10分鐘（3000r/min）后留取標本，置于-70℃冰箱凍存待測。緊接著處死大鼠，解剖摘除雙腎，觀察腎臟色澤及大小，并將其縱行解剖，經(jīng)鹽水沖洗后放置于10％甲醛溶液中進行固定，備行石蠟切片。
　　4.觀察指標ELISA法檢測尿液IL-18

4、、二乙酰肟法測定血尿素氮（BUN），苦味酸法測定血清肌酐（SCr）。石蠟切片經(jīng)蘇木素-伊紅(HE)染色后于光鏡下觀察腎組織病理形態(tài)學改變。
　　結(jié)果：
　　1、尿液IL-18、血SCr、BUN檢測結(jié)果：M組尿IL-18于再灌注損傷后6h開始升高，12h達高峰(p<0.05)，48h仍高于假手術(shù)組(p<0.05)；尿素氮于再灌注損傷后6h升高，48h達高峰(p<0.01)；而血肌酐則于再灌注損傷后48h才顯著升高(p<0.05

5、)。S組各時間點尿IL-18、血SCr、BUN差異無統(tǒng)計學意義（p>0.05）。
　　2、腎組織病理改變：
　　（1）肉眼觀察：S組腎臟外觀正常，縱向剖開后顏色紅潤。M組見腎臟呈暗紅色，體積增大，部分表面可見散在小片狀出血，縱向剖開后腎皮質(zhì)顏色略白，髓質(zhì)呈暗紅色。
　?。?）光鏡觀察：S組腎臟組織結(jié)構(gòu)未見異常。M組受損腎小管上皮細胞則可見普遍水腫，管腔明顯擴張、刷狀緣消失，另有較少量上皮細胞脫落、變性、壞死，在管腔內(nèi)可

6、看到壞死脫落的細胞碎屑；至12h時可見間質(zhì)水腫壓迫致管腔明顯狹窄，蛋白管型于6h出現(xiàn)。腎小球無明顯病理改變。
　　結(jié)論：
　　1、IRI后，血BUN水平于6h開始升高，隨再灌注時間的延長，其水平亦呈上升趨勢；SCr水平升高較晚，于損傷后48h才顯著升高。
　　2、IRI后后腎臟病理改變表現(xiàn)為腎小管及腎間質(zhì)受到損傷，和急性腎損傷的病理改變特征相吻合。
　　3、IRI后，尿IL-18的水平于6h開始升高，12h達高峰