泄?jié)峤舛?、活血通絡中藥對糖尿病腎病大鼠腎組織中血管生成素1表達的影響.pdf

1、目的:本研究通過高糖高脂飼料飼養(yǎng)加腹腔注射小劑量鏈脲佐菌素(streptozotocin，STZ)建立DM大鼠模型，應用泄?jié)峤舛?、活血通絡中藥、厄貝沙坦以及兩者聯(lián)合應用對其進行干預，通過觀察實驗動物各生化指標，腎臟病理形態(tài)學變化以及腎皮質(zhì)組織中血管生成素1(Angiopoietin-1，Ang-1)的表達水平，來探討Ang-1與DN的關系，以及泄?jié)峤舛?、活血通絡中藥對DN大鼠腎臟的保護作用和可能機制，為臨床治療DN提供實驗依據(jù)。

2、　　方法:雄性Sprague-Dauley大鼠85只，體重170±10g，適應性飼養(yǎng)一周，測定血糖和尿蛋白均為陰性后，隨機選取15只為正常組(NG)，給予普通飼料喂養(yǎng)。其余大鼠給予高糖高脂飼料喂養(yǎng)，12周后給予一次性腹腔注射STZ35mg/kg，正常組大鼠給予一次性腹腔注射相當劑量的0.1 mol/L枸櫞酸緩沖液。72小時后尾靜脈采血測隨機血糖≥16.7mmol/L為糖尿病造模成功，造模過程中死亡兩只，另有一只大鼠血糖不達標，均予以剔除

3、。將成模大鼠隨機分為4組:模型組(MG)、中藥組(ZG)、西藥組(XG)、中藥加西藥組(JG)，中藥加西藥組16只，剩余各組17只。成模后開始給藥，每日一次，治療組每只大鼠給予4ml/d的藥物溶液，正常組與模型組均灌服等體積的生理鹽水，共給藥16周。自由飲水、進食，室溫22-25℃，相對濕度40％-60％，12小時交替照明。在給藥期間的第4周、8周、12周各監(jiān)測體重、血糖及尿蛋白。于給藥第16周末，禁食12小時，不禁水，留取各組大鼠24

4、小時尿液，測定24小時尿蛋白定量，稱量體重，10％水合氯醛麻醉動物，腹主動脈取血，摘取右側(cè)腎臟并稱重，計算肥大指數(shù)，留取腎臟標本，光鏡、電鏡下觀察腎臟病理形態(tài)學變化，提取各組腎皮質(zhì)RNA，用實時熒光定量PCR方法檢測Ang-1mRNA的含量，同時免疫組化染色觀察Ang-1的表達情況。
　　結果:
　　1.各組大鼠體重、腎重、肥大指數(shù)（腎重/體重）與正常組比較，各治療組及模型組體重明顯減輕(P＜0.05);各治療組及模型組之間

5、體重無顯著差異（P＞0.05）。與正常組比較，各治療組及模型組肥大指數(shù)明顯升高（P＜0.05）;各治療組及模型組之間比較無明顯差別(P＞0.05)。各組右腎重比較差異均無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)。
　　2.各組大鼠24小時尿蛋白定量與正常組比較，各治療組及模型組24小時尿蛋白定量(24-hour urinary totalprotein，24hUTP)均升高（P＜0.05）;與模型組比較，各治療組UTP下降（P＜0.05）;與中

6、藥組及西藥組比較，中藥加西藥組UTP下降（P＜0.05）;中藥組UTP與西藥組相比無明顯差異（P＞0.05）。
　　3.各組大鼠血清總蛋白、白蛋白、血脂及腎功能的比較與正常組相比，模型組及各治療組血清總蛋白(TP)及白蛋白(ALB)均降低(P＜0.05);與模型組比較，各治療組TP及ALB均升高（P＜0.05）;與中藥組及西藥組比較，中藥加西藥組TP及ALB升高（P＜0.05）;中藥組與西藥組相比無明顯差異（P＞0.05）。與正常

7、組相比，模型組及各治療組總膽固醇(TC)及甘油三脂(TG)均明顯升高(P＜0.05);與模型組比較，各治療組TC及TG降低(P＜0.05);與中藥組及西藥組比較，中藥加西藥組TC及TG降低(P＜0.05);中藥組與西藥組相比無明顯差異(P＞0.05)。正常組、模型組、各治療組血肌酐及尿素氮比較均無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）。
　　4.各組大鼠糖化血紅蛋白(HbA1c)的比較與正常組比較，模型組及各治療組HbA1c均明顯升高(P＜0

8、.05);與模型組及西藥組相比，中藥加西藥組及中藥組HbA1c均明顯降低(P＜0.05);西藥組HbA1c比模型組降低但無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）;中藥加西藥組HbA1c比中藥組降低但無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）。
　　5.腎臟病理形態(tài)學觀察
　　5.1 光鏡觀察正常組大鼠腎臟腎小球正常大小，結構清晰，未見腎小球肥大或萎縮，基底膜無增厚，系膜基質(zhì)分布面積正常。模型組大鼠腎臟腎小球明顯肥大，基底膜增厚，系膜區(qū)顯著增寬。各治療

9、組以上病理改變較模型組為輕，各治療組間無明顯差異。
　　5.2 電鏡觀察正常組腎小球內(nèi)皮細胞未見異常，基底膜厚度均勻，結構完整，足突無融合、缺如等異常改變;模型組腎小球內(nèi)皮細胞明顯增生、突出，基底膜明顯增厚，伴有足細胞足突廣泛融合;各治療組也均有不同程度的病理改變，但較模型組輕，各組間差異不明顯。
　　6.各組大鼠腎皮質(zhì)Ang-1的表達
　　6.1 Real-Time PCR檢測腎組織Ang-1 mRNA的表達與正常組

10、相比，模型組及各治療組Ang-1 mRNA表達量均明顯升高(P＜0.05);與模型組比較，各治療組Ang-1 mRNA表達量均明顯升高（P＜0.05）;與西藥組和中藥組比較，中藥加西藥組Ang-1 mRNA表達量明顯升高（P＜0.05）;西藥組與中藥組相比差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）。
　　6.2 免疫組織化學法檢測腎組織Ang-1的表達正常組Ang-1在腎小球足細胞少量表達;與正常組相比，各造模組大鼠腎組織中Ang-1表達明

11、顯增加(P＜0.05)，突出表達于足細胞;與模型組比較，各治療組Ang-1表達明顯增加（P＜0.05）;各治療組之間比較，中藥加西藥組腎組織Ang-1表達最強，與中藥組和西藥組相比有明顯差異（P＜0.05）;中藥組與西藥組相比Ang-1的表達無明顯差別（P＞0.05）。
　　結論:
　　1.泄?jié)峤舛?、活血通絡中藥可減少尿蛋白的排泄，升高血清總蛋白、白蛋白，降低血糖、血脂，延緩DN的進展。
　　2.泄?jié)峤舛尽⒒钛ńj中藥