益氣養(yǎng)陰化瘀通絡(luò)中藥對(duì)糖尿病腎病大鼠腎臟的保護(hù)作用及對(duì)ICAM-1-VCAM-1影響的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的；糖尿病(diabetes mellitus，DM)的發(fā)病率隨著飲食結(jié)構(gòu)，人民生活水平提高，工作及生活環(huán)境的改變，人口老齡化迅速增高。糖尿病腎病(diabetic nephropathy，DN)患者也隨之增加，DN是糖尿病血管并發(fā)癥中最常見(jiàn)的慢性并發(fā)癥，是導(dǎo)致終末期腎衰竭(end-stage renal disease，ESRD)的主要原因。DN基本病理改變是腎小球基底膜增厚、系膜細(xì)胞增生和細(xì)胞外基質(zhì)(extracellular m

2、atrix，ECM)堆積導(dǎo)致腎小球硬化。DM時(shí)，由于腎小球高濾過(guò)、高血糖、氧化應(yīng)激、細(xì)胞因子等因素的刺激，損傷腎臟固有細(xì)胞，腎臟組織ICAM－1、VCAM－1表達(dá)上升，介導(dǎo)白細(xì)胞與內(nèi)皮細(xì)胞粘附增加，致使毛細(xì)血管狹窄，阻塞。同時(shí)可能因炎癥介質(zhì)釋放，血管收縮，通透性增加，而引起腎小球內(nèi)皮功能障礙，促進(jìn)腎小球硬化。Clansen等研究亦表明細(xì)胞間黏附分子－1(intercellular adhesion molecule－1，ICAM－1)，

3、和血管細(xì)胞黏附分子－1(Vascular cell adhesion molecule－1，VCAM－1)參與了糖尿病腎病的發(fā)展機(jī)制，能增加尿蛋白，促進(jìn)細(xì)胞外基質(zhì)的沉積，加速腎小球硬化[1]。研究證明ICAM－1和VCAM－1在糖尿病腎病中表達(dá)明顯上調(diào)，促進(jìn)炎癥的發(fā)生發(fā)展，炎性細(xì)胞浸潤(rùn)腎組織，進(jìn)而導(dǎo)致腎小球硬化。
　　到目前為止，還沒(méi)有可完全阻斷糖尿病腎病進(jìn)程的有效藥物。尋找有效治療方法及阻斷其進(jìn)程的藥物是目前國(guó)內(nèi)外研究的關(guān)注熱點(diǎn)

4、。傳統(tǒng)中醫(yī)藥治療DN具有顯著的優(yōu)勢(shì)和特色，不僅改善了臨床癥狀，保護(hù)腎功能，延緩糖尿病腎病的進(jìn)展。提高DN患者生存質(zhì)量，而且不良反應(yīng)小，日益引起國(guó)內(nèi)外廣大學(xué)者的關(guān)注。而傳統(tǒng)醫(yī)學(xué)以其結(jié)合靶點(diǎn)多，途徑多，全面調(diào)節(jié)，個(gè)體化治療方案，在臨床防治DN中具有廣闊前景。在臨床治療中，依據(jù)中醫(yī)學(xué)的獨(dú)特病因病機(jī)理論，通過(guò)科學(xué)研究，基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)，結(jié)合臨床表現(xiàn)，逐步意識(shí)到DN的主要病機(jī)為消渴病日久傷陰耗氣，導(dǎo)致氣陰兩虛，血瘀日久不愈而久病入絡(luò)其基本病機(jī)，治療以益氣

5、養(yǎng)陰化瘀通絡(luò)為主，且該方在防治糖尿病腎病中，取得了很好的治療效果。本實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步通過(guò)高脂飼料聯(lián)合STZ復(fù)制糖尿病大鼠動(dòng)物模型，采用中藥復(fù)方干預(yù)，探討其對(duì)DN的治療作用，并探討本方對(duì)DN發(fā)生發(fā)展的影響及其可能的發(fā)病機(jī)制。
　　方法：健康雄性Sprague-Dauley大鼠40只，體重為120g～150g，適應(yīng)性飼養(yǎng)一周。分別檢測(cè)血糖、尿糖和尿蛋白均為陰性者用于實(shí)驗(yàn)。按體重隨機(jī)分為正常組10只，給予普通飼料。造模組30只，給予高脂飼料。

6、12周后，造模組大鼠禁食不禁水，按一次性腹腔注射STZ(30 mg/kg)。正常組大鼠注射相應(yīng)體積的枸櫞酸緩沖液。72h后尾靜脈取血測(cè)血糖，血糖≥16.7mmol/L為DM造模成功。將成模大鼠按體重隨機(jī)分為模型組(Modelgroups)，益氣養(yǎng)陰化瘀通絡(luò)中藥組(ZY1)，益氣養(yǎng)陰通絡(luò)中藥組(ZY2)。DM模型成模后開始給藥。益氣養(yǎng)陰化瘀通絡(luò)組(黃芪、黃精、地黃、丹參、川芎、地龍、水蛭、全蝎)及益氣養(yǎng)陰通絡(luò)組(黃芪、黃精、地黃、地龍、水

7、蛭、全蝎)大鼠分別按1g/kg及0.77g/kg給藥。各組中藥顆粒用開水溶解后灌胃，日1次，給藥量按體表面積折算。正常組和模型組灌服相應(yīng)量生理鹽水，連續(xù)給藥32周。實(shí)驗(yàn)期間，不給予胰島素及其他干預(yù)，不定期檢測(cè)尾靜脈血糖，血糖緩解者予以剔除。正常組給予普通飼料，模型組，益氣養(yǎng)陰化瘀通絡(luò)中藥組，益氣養(yǎng)陰通絡(luò)中藥組均給予高脂飼料。于給藥后32周末，禁食不禁水，收集24小時(shí)尿液，殺檢動(dòng)物，留取血、腎組織，測(cè)定實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的24小時(shí)尿蛋白定量、腎功能

8、、光鏡、電鏡下觀察各組大鼠腎臟的病理改變，免疫組化染色法檢測(cè)腎組織ICAM－1、VCAM-1的表達(dá)。
　　結(jié)果：
　　1每組大鼠體重，肥大指數(shù)(腎重/體重)
　　模型組，兩中藥治療組的大鼠與正常組大鼠相比，體重顯著下降(P<0.01)；模型組，兩中藥組大鼠體重之間無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；模型組，兩中藥治療組大鼠肥大指數(shù)比正常組顯著增加(P<0.05)，模型組大鼠，ZY1與ZY2之間大鼠肥大指數(shù)無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0

9、.05)。
　　2每組大鼠24小時(shí)尿蛋白定量
　　與正常組大鼠相比，模型組，兩中藥治療組大鼠24小時(shí)尿蛋白定量均明顯增高(P<0.01)；與模型組相比，兩中藥治療組24小時(shí)尿蛋白定量均明顯下降(P<0.01)；ZY1與ZY2相比顯著下降(P<0.01)。
　　3每組大鼠BUN，Scr的比較
　　與正常組相比，模型組大鼠，兩中藥治療組大鼠血清肌酐水平比正常組大鼠明顯增高(P<0.01)，與模型組大鼠相比，兩中藥治療

10、組大鼠血清肌酐水平顯著下降(P<0.05)；兩中藥治療組之間Scr水平無(wú)顯著差異(P>0.05)；與正常組大鼠相比，模型組大鼠，兩中藥治療組大鼠BUN水平均明顯上升(P<0.01)，與模型組相比，兩中藥治療組大鼠BUN水平明顯下降(P<0.05)，ZY1與ZY2之間BUN水平無(wú)顯著差異(P>0.05)。
　　4腎臟病理形態(tài)學(xué)觀察
　　4.1光鏡觀察
　　正常組大鼠腎小球結(jié)構(gòu)完整，未見(jiàn)腎小球肥大，腎小球毛細(xì)血管基底膜，系

11、膜細(xì)胞及其基質(zhì)無(wú)明顯改變。模型組大鼠可見(jiàn)腎小球明顯肥大，腎小球毛細(xì)血管基底膜增厚，系膜區(qū)變寬。兩中藥治療組腎小球均有不同程度的病理改變，同模型組大鼠相比較，兩治療組大鼠腎小球肥大減輕，系膜細(xì)胞及基質(zhì)少量增多，兩中藥治療組間無(wú)明顯區(qū)別。
　　4.2電鏡觀察
　　正常組腎小球基底膜均勻無(wú)增厚，足突均勻分布，模型組大鼠腎小球毛細(xì)血管基底膜增厚明顯，部分增生，足突廣泛融合。兩中藥組大鼠腎小球毛紐血管基底膜較正常，呈勻質(zhì)樣增厚，足細(xì)胞

12、局部融合。
　　5免疫組化染色法檢測(cè)腎組織ICAM－1、VCAM－1表達(dá)
　　ICAM－1：正常組：腎小球內(nèi)皮細(xì)胞、系膜細(xì)胞，包曼氏囊壁少許染色，腎小球系膜區(qū)，基底膜均少量表達(dá)；模型組：腎球內(nèi)皮細(xì)胞、系膜細(xì)胞可見(jiàn)強(qiáng)陽(yáng)性棕黃色沉積，并有腎小球與囊壁粘連，粘連處呈陽(yáng)性，可見(jiàn)腎小管變性壞死；兩治療組與模型組相比ICAM－1的表達(dá)范圍和程度均減輕。
　　VCAM－1：正常組：可見(jiàn)腎小球內(nèi)皮細(xì)胞和系膜細(xì)胞，腎小管上皮細(xì)胞少量著色