MPTP導(dǎo)致的小鼠紋狀體多巴胺轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白及多巴胺含量的變化.pdf

1、目的:多巴胺轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白(dopamine transporter,DAT)是位于紋狀體多巴胺(dopamine,DA)能神經(jīng)末梢突觸前膜的一種膜蛋白,能將突觸間隙內(nèi)的DA重新攝入到突觸前膜,調(diào)節(jié)突觸間隙DA的濃度。已有研究證明臨床上已診斷為帕金森病(Parkinson's disease,PD)的患者的DAT已有很大的下降,而DA能神經(jīng)元損傷過程中紋狀體DAT和DA含量的動(dòng)態(tài)變化情況尚未見報(bào)道,恰恰該方面研究可為PD的病因、早期診斷及治療

2、提供重要依據(jù)。1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氫吡啶(1-methyl-4-phenyl-1,2,3,6-tetrahydropyridine,MPTP)慢性損傷的PD模型表現(xiàn)為進(jìn)行性發(fā)展的趨勢,形態(tài)學(xué)研究表明與PD中DA能神經(jīng)元的損傷類似,因此本實(shí)驗(yàn)應(yīng)用MPTP慢性損傷小鼠建立PD模型,以黑質(zhì)酪氨酸羥化酶(tyrosine hydroxylase,TH)免疫組化染色的陽性(TH+)細(xì)胞反應(yīng)DA神經(jīng)元損傷情況,檢測DA能神經(jīng)元損傷

3、過程中紋狀體DAT和DA含量的動(dòng)態(tài)變化,探討兩者之間的關(guān)系。
　　 方法:將C57BL/6小鼠分實(shí)驗(yàn)組、對照組。實(shí)驗(yàn)組給予MPTP25mg/kg腹腔注射,對照組給予相同劑量的生理鹽水,每周2次,連續(xù)五周。用于行為學(xué)檢測的小鼠在每周第2次給藥后第1天,采用懸掛實(shí)驗(yàn)觀察其行為變化;行生化檢測的小鼠在每周第2次給藥后第1天取材,采用免疫組化法觀察黑質(zhì)致密部TH的表達(dá);采用免疫印跡法檢測紋狀體DAT表達(dá)水平;采用高效液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法

4、檢測紋狀體DA含量,結(jié)合資料進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。
　　 結(jié)果:1.行為學(xué)結(jié)果顯示隨著給藥時(shí)間延長,實(shí)驗(yàn)組小鼠懸掛測試評分逐漸下降,于第4周開始與對照組比較,具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。2.免疫組化結(jié)果顯示實(shí)驗(yàn)組小鼠中腦黑質(zhì)TH+神經(jīng)細(xì)胞數(shù)目逐漸減少,從第3劇開始與對照組比較,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05),從4周開始與對照組比較,具有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.001)。3.免疫印跡法結(jié)果顯示實(shí)驗(yàn)組小鼠紋狀體的DAT的表達(dá)量逐漸下

5、降,從第2周開始與對照組比較,具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05),從第4周開始與對照組比較,具有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.001)。4.高效液相色譜-質(zhì)譜檢測結(jié)果顯示實(shí)驗(yàn)組小鼠紋狀體DA含量逐漸下降,從給藥2周后與對照組比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05),從第3周開始與對照組比較,具有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.001)。5.實(shí)驗(yàn)組小鼠紋狀體DAT的表達(dá)量和DA含量明顯相關(guān),相關(guān)系數(shù)為0.96(P＜0.001),而且兩者與中腦黑質(zhì)TH+神經(jīng)細(xì)胞計(jì)數(shù)