鼻咽癌高發(fā)區(qū)EB病毒環(huán)境激活物的流行病學(xué)研究及CYP1A1基因與鼻咽癌易感性的關(guān)聯(lián)分析.pdf

1、鼻咽癌(Nasopharyngeal carcinoma,NPC)在世界大部分地區(qū)為罕見腫瘤，但在中國南方部分省市和亞洲東南部一些國家發(fā)病率卻很高，其中我國南方的廣東省是世界最高發(fā)地區(qū)，世界人口標(biāo)化發(fā)病率高達男性約30/10萬，女性約13/10萬。眾多證據(jù)均表明，鼻咽癌的發(fā)病機制遵循遺傳—環(huán)境—EB病毒三大因素的交互作用。EB病毒(Epstein-Barr Virus，EBV)感染和環(huán)境因素是鼻咽癌的重要病因。有研究表明在鼻咽癌高發(fā)地區(qū)

2、EBV陽性的健康成年人發(fā)展為鼻咽癌的風(fēng)險較高。此外，也有證據(jù)表明EBV的再激活伴隨著鼻咽癌的發(fā)生、發(fā)展全過程。廣東咸魚是鼻咽癌高發(fā)區(qū)某些地區(qū)人們從兒童時期就開始食用的常見食物之一。早在1988年就有研究發(fā)現(xiàn)廣東咸魚提取物對Raji細胞EBV有激活作用。另外，大戟屬植物是高發(fā)區(qū)常用的湯料之一，曾毅教授等發(fā)現(xiàn)中國傳統(tǒng)中草藥和大戟科植物土壤中的提取物中含有激活Raji細胞EBV早期抗原的物質(zhì)。這些發(fā)現(xiàn)均提示人們?nèi)粘Ｉ钏佑|的一些環(huán)境物質(zhì)或者

3、食物中存在可以誘導(dǎo)EBV再激活的物質(zhì)，這些環(huán)境因素暴露量的差異也許是導(dǎo)致血清中EBV水平差異，進而引起鼻咽癌發(fā)病差異的主要因素之一。但是，目前尚無來自流行病學(xué)的證據(jù)支持廣東咸魚或中草藥等對EBV存在再激活作用。大量的研究表明吸煙、飲酒、食用腌制食品、傳統(tǒng)中草藥等都和鼻咽癌的發(fā)病風(fēng)險升高有關(guān)，但是具體機制并不清楚。這些環(huán)境因素對EBV的再激活是否有作用目前也尚不清楚。在論文第一部分，我們通過在鼻咽癌高發(fā)區(qū)——廣東省開展大規(guī)模的流行病學(xué)調(diào)查

4、篩查可能的EBV環(huán)境激活物。另外，移民流行病學(xué)研究證據(jù)和復(fù)合分離分析研究結(jié)果均提示遺傳因素在鼻咽癌的發(fā)生發(fā)展中具有重要作用。細胞色素P450(Cytochrome P450，CYP)是體內(nèi)代謝活化亞硝酸鹽等致癌物質(zhì)的重要代謝酶。作為CYP450超家族的亞家族之一，CYP1A1遺傳多態(tài)性與頭頸腫瘤、肺癌、乳腺癌、子宮內(nèi)膜癌等多種腫瘤易感性相關(guān)，是煙草前致癌物如多環(huán)芳烴和芳香烴類等的主要代謝活化酶，可以將各種前致癌物質(zhì)轉(zhuǎn)化為具有致癌能力的活

5、性中間產(chǎn)物。因此，在論文第二部分，我們以廣東鼻咽癌核心家系為研究對象，利用以家系為基礎(chǔ)的關(guān)聯(lián)研究探討基因CYP1A1上m1位點和m2位點與鼻咽癌易感性的關(guān)系。
　　 第一部分：鼻咽癌高發(fā)區(qū)EB病毒環(huán)境激活物的流行病學(xué)研究。
　　 目的：有研究發(fā)現(xiàn)在鼻咽癌高發(fā)區(qū)EBV陽性的健康成年人發(fā)展為鼻咽癌的風(fēng)險較高。此外，也有證據(jù)表明EBV的再激活伴隨著鼻咽癌的發(fā)生、發(fā)展全過程。為了篩查EBV的環(huán)境激活物從而為高發(fā)區(qū)鼻咽癌的一級預(yù)防

6、提供直接線索，我們在廣東省開展了一項大規(guī)模的流行病學(xué)研究。
　　 方法：2005年10月至2007年10月，我們收集了一個覆蓋廣東省21個地區(qū)的健康人群，其中健康男性1616例(Test set)。我們對七個公認(rèn)的鼻咽癌的潛在危險因素如吸煙、飲酒、飲茶、兒童時期飲食咸魚、腌菜以及中草藥使用情況等進行了詳細記錄。對問卷調(diào)查時收集的外周血采用傳統(tǒng)的免疫酶法進行EB病毒殼抗原抗體(VCA-IgA)的檢測并采用卡方檢驗、非條件logis

7、tic回歸等分析這些因素與VCA-IgA的關(guān)聯(lián)。為了進一步驗證結(jié)果，我們于2008年10月在鼻咽癌高發(fā)區(qū)——四會市收集了1674例健康男性的信息和外周血(Validation set)，并測定血中VCA-IgA和EBV核抗原抗體(EBNA1-IgA)的水平。采用SPSS13.0統(tǒng)計軟件包進行數(shù)據(jù)處理。
　　 結(jié)果：最終進入分析的有來自Test set的1571名健康男性和來自Validation set的1657名健康男性。吸煙

8、是被確定的唯一與EBV血清陽性有顯著關(guān)聯(lián)的因素。吸煙累計暴露量高的人其血清EBV陽性的風(fēng)險較高(Ptrend=3.62×10-5)。更令人鼓舞的是，這一結(jié)果在Validation set中得到了很好的驗證(Ptrend=0.001)。將兩個人群合并后分析不同香煙暴露劑量對EBV血清學(xué)狀態(tài)的影響，結(jié)果發(fā)現(xiàn)和從不吸煙者相比，當(dāng)吸煙暴露量＜15，=15-30，和≥30包年時，其EBV血清學(xué)陽性的風(fēng)險比分別為1.77(95％置信區(qū)間[CI]，1

9、.34-2.33)，1.98(95％CI，1.50-2.61)和2.52(95％CI，1.90-3.35)。有趣的是，戒煙者的血清中EBV陽性的風(fēng)險比明顯降低，當(dāng)香煙暴露量＜30和≥30包年時，其EBV血清學(xué)陽性的風(fēng)險比分別為1.50(95％CI，1.04-2.16)和1.71(95％CI，0.96-3.04)(Ptrend=0.04)。
　　 結(jié)論：在鼻咽癌高發(fā)區(qū)——廣東省健康男性中，吸煙與EBV的再激活緊密相關(guān)。吸煙暴露量越

10、大的人其血清EBV抗體滴度越高。因此，在鼻咽癌高發(fā)地區(qū)提倡戒煙將有助于降低當(dāng)?shù)啬行跃用裱逯蠩BV的水平，有可能進一步降低當(dāng)?shù)乇茄拾┑陌l(fā)病率。
　　 第二部分：CYP1A1基因與鼻咽癌易感性的關(guān)聯(lián)分析。
　　 目的：利用以核心家系為基礎(chǔ)的關(guān)聯(lián)研究探討細胞色素P450酶系CYP1A1基因中m1和m2遺傳多態(tài)性并分析其與鼻咽癌易感性的關(guān)聯(lián)。
　　 方法：收集457個廣東鼻咽癌核心家系(每個核心家系由患者和父母或同胞構(gòu)

11、成)共2134個成員作為研究對象，采用聚合酶鏈反應(yīng)-限制性片段長度多態(tài)性方法對CYP1A1基因中m1(MspI)和m2共2個單核甘酸多態(tài)性(SNP)位點(其參考編號分別為rs4646903和rs1048943)進行基因分型。隨機挑選聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)產(chǎn)物測序驗證其基因型。運用家系為基礎(chǔ)的相關(guān)性檢驗(Family-BasedAssociation Test，F(xiàn)BAT)軟件分析這兩個SNPs位點的基因型及其單體型與鼻咽癌易感性之間的關(guān)聯(lián)

12、。
　　 結(jié)果：FBAT分析結(jié)果顯示：CYP1A1基因的m1(MspI)多態(tài)性與鼻咽癌的易感性之間無相關(guān)性(x2=2.399，P=0.301)；m2多態(tài)性在EB病毒殼抗原抗體(VCA-IgA)＜1∶80即低滴度組中，在累加模式和顯性模式下，其等位基因G顯示了從親代到子代傳遞減少(Z=-2.120，P=0.034；Z=-2.303，P=0.021)，全局統(tǒng)計仍存在該趨勢(x2=5.394，P=0.067)。單體型“T-G”可以降低