尼克酰胺N-甲基轉移酶過表達介導人結腸癌細胞系SW480耐5-FU的機制研究.pdf

1、背景:尼克酰胺N-甲基化酶(nicotinamide N-methylransferase，NNMT，EC2.1.1.1)是S-腺苷-L蛋氨酸依賴的甲基轉移酶，以S-腺苷-L蛋氨酸為甲基供體，催化尼克酰胺及其他吡啶類化合物的甲基化，參與尼克酰胺平衡、藥物及其他外源性物質(zhì)的代謝。正常主要表達于人肝臟組織中，其次在腎、肺、骨骼肌、心臟、胎盤等組織中也有一定表達。目前發(fā)現(xiàn)NNMT在惡性膠質(zhì)瘤、胰腺癌、腎癌、甲狀腺乳頭狀癌、胃癌、結直腸癌等多種

2、腫瘤組織中存在異常高表達，且與腫瘤細胞增殖、轉移、耐放化療等多種生物學功能密切相關。但NNMT在腫瘤細胞中過表達對腫瘤細胞耐藥及其相關機制方面有待進一步研究。
　　目的:研究NNMT過表達對人結直腸癌細胞SW480對5-FU耐藥方面的影響及相關機制，為腫瘤個體化治療和基因治療尋找新的潛在靶點。
　　方法:采用已構建好的真核表達質(zhì)粒pcDNA3.1/NNMT，及相應的pcDNA3.1空質(zhì)粒轉染人結直腸癌細胞系SW480，用G4

3、18篩選穩(wěn)定轉染的細胞株，建立NNMT穩(wěn)定高表達的腫瘤細胞模型和空質(zhì)粒pcDNA3.1轉染的空白對照模型。采用Real-Time QPCR和Western blot分別驗證轉染前后NNMT mRNA和蛋白水平的表達，MTT法分析NNMT對腫瘤細胞5-FU敏感性的影響、流式細胞術分析細胞凋亡變化、Western blot檢測相關信號通路及凋亡分子的變化。
　　結果:成功構建并分離SW480細胞系NNMT過表達模型單克隆兩株（SW48

4、0/NNMT-29、SW480/NNMT-40）及相應單克隆空白對照模型（SW480/Vector）。NNMT過表達表達顯著降低了結直腸癌細胞系SW480細胞對5-FU的敏感度，明顯減少了5-FU誘導的凋亡，且內(nèi)源性和外源性凋亡通路均參與了NNMT介導的腫瘤細胞對5-FU的耐藥。另外，ERK、 P38、JNK/MAPK信號通路均參與了NNMT介導的腫瘤細胞對5-FU的耐藥。
　　結論:NNMT介導腫瘤細胞對5-FU的耐藥并與抗凋亡