尼克酰胺N-甲基轉(zhuǎn)移酶過表達(dá)介導(dǎo)人結(jié)腸癌細(xì)胞系SW480耐5-FU的機制研究.pdf

1、背景:尼克酰胺N-甲基化酶(nicotinamide N-methylransferase，NNMT，EC2.1.1.1)是S-腺苷-L蛋氨酸依賴的甲基轉(zhuǎn)移酶，以S-腺苷-L蛋氨酸為甲基供體，催化尼克酰胺及其他吡啶類化合物的甲基化，參與尼克酰胺平衡、藥物及其他外源性物質(zhì)的代謝。正常主要表達(dá)于人肝臟組織中，其次在腎、肺、骨骼肌、心臟、胎盤等組織中也有一定表達(dá)。目前發(fā)現(xiàn)NNMT在惡性膠質(zhì)瘤、胰腺癌、腎癌、甲狀腺乳頭狀癌、胃癌、結(jié)直腸癌等多種

2、腫瘤組織中存在異常高表達(dá)，且與腫瘤細(xì)胞增殖、轉(zhuǎn)移、耐放化療等多種生物學(xué)功能密切相關(guān)。但NNMT在腫瘤細(xì)胞中過表達(dá)對腫瘤細(xì)胞耐藥及其相關(guān)機制方面有待進(jìn)一步研究。
　　目的:研究NNMT過表達(dá)對人結(jié)直腸癌細(xì)胞SW480對5-FU耐藥方面的影響及相關(guān)機制，為腫瘤個體化治療和基因治療尋找新的潛在靶點。
　　方法:采用已構(gòu)建好的真核表達(dá)質(zhì)粒pcDNA3.1/NNMT，及相應(yīng)的pcDNA3.1空質(zhì)粒轉(zhuǎn)染人結(jié)直腸癌細(xì)胞系SW480，用G4

3、18篩選穩(wěn)定轉(zhuǎn)染的細(xì)胞株，建立NNMT穩(wěn)定高表達(dá)的腫瘤細(xì)胞模型和空質(zhì)粒pcDNA3.1轉(zhuǎn)染的空白對照模型。采用Real-Time QPCR和Western blot分別驗證轉(zhuǎn)染前后NNMT mRNA和蛋白水平的表達(dá)，MTT法分析NNMT對腫瘤細(xì)胞5-FU敏感性的影響、流式細(xì)胞術(shù)分析細(xì)胞凋亡變化、Western blot檢測相關(guān)信號通路及凋亡分子的變化。
　　結(jié)果:成功構(gòu)建并分離SW480細(xì)胞系NNMT過表達(dá)模型單克隆兩株（SW48

4、0/NNMT-29、SW480/NNMT-40）及相應(yīng)單克隆空白對照模型（SW480/Vector）。NNMT過表達(dá)表達(dá)顯著降低了結(jié)直腸癌細(xì)胞系SW480細(xì)胞對5-FU的敏感度，明顯減少了5-FU誘導(dǎo)的凋亡，且內(nèi)源性和外源性凋亡通路均參與了NNMT介導(dǎo)的腫瘤細(xì)胞對5-FU的耐藥。另外，ERK、 P38、JNK/MAPK信號通路均參與了NNMT介導(dǎo)的腫瘤細(xì)胞對5-FU的耐藥。
　　結(jié)論:NNMT介導(dǎo)腫瘤細(xì)胞對5-FU的耐藥并與抗凋亡