HIF-1α、GLUT-1在子宮內膜異位癥中的表達及補腎溫陽化瘀方對其影響.pdf

1、目的:子宮內膜異位癥(簡稱內異癥,Endometriosis,Ems)為育齡期婦女常見疾病,發(fā)病率高達10％-15％,且呈明顯上升趨勢,目前病因病機尚未闡明,治療效果不滿意,5年復發(fā)率均在40％以上[1],因此對其發(fā)病相關因素研究及探索有效的治療方法十分必要。本課題通過臨床和動物模型實驗研究,檢測HIF-1α與GLUT-1在Ems異位組織中的表達及相互關系,探討缺氧在Ems發(fā)生發(fā)展中的作用;并通過對HIF-1α和GIUT-1表達的調節(jié),

2、探索補腎溫陽化瘀方治療Ems的作用機理。
　　 材料與方法:
　　 1臨床研究
　　 研究組:按就診順序,選取2008年10月-2009年8月在河北省中醫(yī)院就診,符合本研究納入標準、排除標準,同意手術治療且術前3月未采取過任何與本病癥有關的中西醫(yī)治療的內異癥患者24例,其中:按照臨床病理類型選擇腹膜型、卵巢型、深部浸潤型患者各8例,并于術中由同一資深婦科醫(yī)生參照AFS-r(revised American Fer

3、tility Society,美國生育協(xié)會修正分期法)進行分期,Ⅰ～Ⅱ期10例,Ⅲ～Ⅳ期14例,分別在術中收集異位內膜組織并隨機選取上述內異癥患者在位內膜組織10例,異位組織術后經(jīng)病理證實均為異位內膜標本。
　　 對照組:10例正常子宮內膜來源于同期非內異癥、非子宮內膜疾病行子宮全切術或診斷性刮宮患者,術前3月無甾體類激素治療史。術后經(jīng)病理證實均為正常內膜組織。
　　 全部患者均知情同意,兩組年齡比較分布均衡,無統(tǒng)計學差

4、異,具有可比性。
　　 2動物實驗
　　 選用動情周期正常的健康SPF級雌性未孕大鼠100只,體重200±20g,將100只大鼠隨機選取12只設為“對照組”,其余88只參照Jones方法復制腹膜型內異癥大鼠模型。制模4周后無菌操作剖腹,測量造模成功的65只大鼠移植物體積為治療前體積,并按隨機數(shù)字表法將其分為4組:中藥高劑量組(16只)、中藥低劑量組(16只)、丹那唑組(16只)和模型組(17只)。中藥高、低劑量組分別按6

5、1.76g/kg、15.41g/kg(相當于臨床成人劑量的20倍、5倍)給予補腎溫陽化瘀方溶液(由肉桂、制附子、延胡索、小茴香、川芎、桑寄生、沒藥、川楝子、黨參、白術、川牛膝等組成)灌胃;丹那唑組給予100mg/kg丹那唑水溶液灌胃;模型組及對照組每日灌服蒸餾水2ml,每日一次,連用4周。末次給藥后,禁食8小時,斷頭處死,無菌操作再次剖腹,肉眼觀察各異位組織形態(tài)的差異,測量并記錄異位灶體積,取各組異位內膜組織,吸去血液,于4％多聚甲醛溶

6、液中固定。
　　 3觀察項目與數(shù)據(jù)處理
　　 3.1以游標卡尺測量移植物治療前后體積,比較各組移植物治療前后的體積變化。
　　 3.2所有標本常規(guī)石蠟包埋,5μm厚連續(xù)切片5張,1張經(jīng)蘇木精-伊紅染色(Hematoxylin-eosin,HE),以病理確診;4張應用免疫組織化學鏈霉菌抗生物素蛋白-過氧化酶連接法(S-P法)染色,檢測HIF-1α、GLUT-1在各組異位內膜組織中的表達。
　　 3.3統(tǒng)計學

7、處理
　　 SPSS13.0統(tǒng)計軟件進行統(tǒng)計處理,數(shù)據(jù)用均數(shù)±標準差(-x±s)表示,組間及治療前后體積變化比較用t檢驗分析,檢驗結果以P＜0.05為有統(tǒng)計學意義。
　　 結果:
　　 1臨床研究
　　 HIF-1∝、GLUT-1在Ems在位內膜及異位內膜均有表達,與對照組比較有顯著性差異(P＜0.01)。HIF-1α在異位內膜的表達均顯著高于在位子宮內膜(P＜0.01),深部浸潤型、卵巢型和腹膜型異位內

8、膜之間HIF-1α的表達無明顯差異(P＞0.05)。GLUT-1在異位內膜的表達均高于在位子宮內膜(P＜0.01),在卵巢型、深部浸潤型和腹膜型異位組織之間的表達無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)。
　　 HIF-1α、GLUT-1的表達隨Ems病變程度的增加而加強,HIF-1α、GLUT-1在Ⅲ～Ⅳ期Ems異位組織的表達顯著高于Ⅰ～Ⅱ期異位組織中的表達(P＜0.01)。
　　 2動物實驗
　　 與對照組在位內膜相比,

9、HIF-1α在模型組異位內膜的表達顯著升高(P＜0.01);中藥高、低劑量組及丹那唑組與模型組比較能顯著降低HIF-1α的高表達(P＜0.01),且與對照組比較無明顯差異(p＞0.05),其中:中藥高劑量組抑制HIF-1α表達效果最好,與丹那唑組比較有差異(P＜0.05),中藥低劑量組與高劑量組及丹那唑組比較無明顯差異(P＞0.05)。GLUT-1在模型組異位內膜的表達與對照組在位內膜相比顯著升高(P＜0.01);中藥高、低劑量組及丹那

10、唑組均能夠顯著抑制GLUT-1的高表達(P＜0.01),與對照組表達無明顯差異(p＞0.05),且以中藥高劑量組作用效果最顯著,中藥低劑量組次之,丹那唑組與中藥高劑量組比較抑制效果有差異(P＜0.05)。
　　 組織學觀察:與對照組比較,模型組異位病灶與腹膜廣泛粘連,有的呈囊性小泡或囊實性。經(jīng)中藥高、低劑量及丹那唑治療后異位灶體積明顯縮小,有的已消失僅呈痕跡。比較移植物治療前后體積,中藥高劑量組體積縮小最顯著(P＜0.01),中

11、藥低劑量組及丹那唑組治療后體積減少亦有統(tǒng)計學意義(P＜0.05),模型組前后體積變化無明顯差異(P＞0.05)。
　　 結論:
　　 1.HIF-1α在內異癥異位組織中高表達,提示異位組織中存在缺氧現(xiàn)象,缺氧可能是內異癥發(fā)病的一個重要誘因。
　　 2.GLUT-1在內異癥異位組織中高表達,可能有利于維持腺體細胞增殖的能量代謝平衡,促進內異癥的發(fā)生。
　　 3.HIF-1α、GLUT-1在內異癥患者異位組織