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文檔簡(jiǎn)介
1、目的:子宮內(nèi)膜異位癥(簡(jiǎn)稱內(nèi)異癥,Endometriosis,Ems)為育齡期婦女常見(jiàn)疾病,發(fā)病率高達(dá)10%-15%,且呈明顯上升趨勢(shì),目前病因病機(jī)尚未闡明,治療效果不滿意,5年復(fù)發(fā)率均在40%以上[1],因此對(duì)其發(fā)病相關(guān)因素研究及探索有效的治療方法十分必要。本課題通過(guò)臨床和動(dòng)物模型實(shí)驗(yàn)研究,檢測(cè)HIF-1α與GLUT-1在Ems異位組織中的表達(dá)及相互關(guān)系,探討缺氧在Ems發(fā)生發(fā)展中的作用;并通過(guò)對(duì)HIF-1α和GIUT-1表達(dá)的調(diào)節(jié),
2、探索補(bǔ)腎溫陽(yáng)化瘀方治療Ems的作用機(jī)理。
材料與方法:
1臨床研究
研究組:按就診順序,選取2008年10月-2009年8月在河北省中醫(yī)院就診,符合本研究納入標(biāo)準(zhǔn)、排除標(biāo)準(zhǔn),同意手術(shù)治療且術(shù)前3月未采取過(guò)任何與本病癥有關(guān)的中西醫(yī)治療的內(nèi)異癥患者24例,其中:按照臨床病理類型選擇腹膜型、卵巢型、深部浸潤(rùn)型患者各8例,并于術(shù)中由同一資深婦科醫(yī)生參照AFS-r(revised American Fer
3、tility Society,美國(guó)生育協(xié)會(huì)修正分期法)進(jìn)行分期,Ⅰ~Ⅱ期10例,Ⅲ~Ⅳ期14例,分別在術(shù)中收集異位內(nèi)膜組織并隨機(jī)選取上述內(nèi)異癥患者在位內(nèi)膜組織10例,異位組織術(shù)后經(jīng)病理證實(shí)均為異位內(nèi)膜標(biāo)本。
對(duì)照組:10例正常子宮內(nèi)膜來(lái)源于同期非內(nèi)異癥、非子宮內(nèi)膜疾病行子宮全切術(shù)或診斷性刮宮患者,術(shù)前3月無(wú)甾體類激素治療史。術(shù)后經(jīng)病理證實(shí)均為正常內(nèi)膜組織。
全部患者均知情同意,兩組年齡比較分布均衡,無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差
4、異,具有可比性。
2動(dòng)物實(shí)驗(yàn)
選用動(dòng)情周期正常的健康SPF級(jí)雌性未孕大鼠100只,體重200±20g,將100只大鼠隨機(jī)選取12只設(shè)為“對(duì)照組”,其余88只參照J(rèn)ones方法復(fù)制腹膜型內(nèi)異癥大鼠模型。制模4周后無(wú)菌操作剖腹,測(cè)量造模成功的65只大鼠移植物體積為治療前體積,并按隨機(jī)數(shù)字表法將其分為4組:中藥高劑量組(16只)、中藥低劑量組(16只)、丹那唑組(16只)和模型組(17只)。中藥高、低劑量組分別按6
5、1.76g/kg、15.41g/kg(相當(dāng)于臨床成人劑量的20倍、5倍)給予補(bǔ)腎溫陽(yáng)化瘀方溶液(由肉桂、制附子、延胡索、小茴香、川芎、桑寄生、沒(méi)藥、川楝子、黨參、白術(shù)、川牛膝等組成)灌胃;丹那唑組給予100mg/kg丹那唑水溶液灌胃;模型組及對(duì)照組每日灌服蒸餾水2ml,每日一次,連用4周。末次給藥后,禁食8小時(shí),斷頭處死,無(wú)菌操作再次剖腹,肉眼觀察各異位組織形態(tài)的差異,測(cè)量并記錄異位灶體積,取各組異位內(nèi)膜組織,吸去血液,于4%多聚甲醛溶
6、液中固定。
3觀察項(xiàng)目與數(shù)據(jù)處理
3.1以游標(biāo)卡尺測(cè)量移植物治療前后體積,比較各組移植物治療前后的體積變化。
3.2所有標(biāo)本常規(guī)石蠟包埋,5μm厚連續(xù)切片5張,1張經(jīng)蘇木精-伊紅染色(Hematoxylin-eosin,HE),以病理確診;4張應(yīng)用免疫組織化學(xué)鏈霉菌抗生物素蛋白-過(guò)氧化酶連接法(S-P法)染色,檢測(cè)HIF-1α、GLUT-1在各組異位內(nèi)膜組織中的表達(dá)。
3.3統(tǒng)計(jì)學(xué)
7、處理
SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)處理,數(shù)據(jù)用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(-x±s)表示,組間及治療前后體積變化比較用t檢驗(yàn)分析,檢驗(yàn)結(jié)果以P<0.05為有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
結(jié)果:
1臨床研究
HIF-1∝、GLUT-1在Ems在位內(nèi)膜及異位內(nèi)膜均有表達(dá),與對(duì)照組比較有顯著性差異(P<0.01)。HIF-1α在異位內(nèi)膜的表達(dá)均顯著高于在位子宮內(nèi)膜(P<0.01),深部浸潤(rùn)型、卵巢型和腹膜型異位內(nèi)
8、膜之間HIF-1α的表達(dá)無(wú)明顯差異(P>0.05)。GLUT-1在異位內(nèi)膜的表達(dá)均高于在位子宮內(nèi)膜(P<0.01),在卵巢型、深部浸潤(rùn)型和腹膜型異位組織之間的表達(dá)無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。
HIF-1α、GLUT-1的表達(dá)隨Ems病變程度的增加而加強(qiáng),HIF-1α、GLUT-1在Ⅲ~Ⅳ期Ems異位組織的表達(dá)顯著高于Ⅰ~Ⅱ期異位組織中的表達(dá)(P<0.01)。
2動(dòng)物實(shí)驗(yàn)
與對(duì)照組在位內(nèi)膜相比,
9、HIF-1α在模型組異位內(nèi)膜的表達(dá)顯著升高(P<0.01);中藥高、低劑量組及丹那唑組與模型組比較能顯著降低HIF-1α的高表達(dá)(P<0.01),且與對(duì)照組比較無(wú)明顯差異(p>0.05),其中:中藥高劑量組抑制HIF-1α表達(dá)效果最好,與丹那唑組比較有差異(P<0.05),中藥低劑量組與高劑量組及丹那唑組比較無(wú)明顯差異(P>0.05)。GLUT-1在模型組異位內(nèi)膜的表達(dá)與對(duì)照組在位內(nèi)膜相比顯著升高(P<0.01);中藥高、低劑量組及丹那
10、唑組均能夠顯著抑制GLUT-1的高表達(dá)(P<0.01),與對(duì)照組表達(dá)無(wú)明顯差異(p>0.05),且以中藥高劑量組作用效果最顯著,中藥低劑量組次之,丹那唑組與中藥高劑量組比較抑制效果有差異(P<0.05)。
組織學(xué)觀察:與對(duì)照組比較,模型組異位病灶與腹膜廣泛粘連,有的呈囊性小泡或囊實(shí)性。經(jīng)中藥高、低劑量及丹那唑治療后異位灶體積明顯縮小,有的已消失僅呈痕跡。比較移植物治療前后體積,中藥高劑量組體積縮小最顯著(P<0.01),中
11、藥低劑量組及丹那唑組治療后體積減少亦有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),模型組前后體積變化無(wú)明顯差異(P>0.05)。
結(jié)論:
1.HIF-1α在內(nèi)異癥異位組織中高表達(dá),提示異位組織中存在缺氧現(xiàn)象,缺氧可能是內(nèi)異癥發(fā)病的一個(gè)重要誘因。
2.GLUT-1在內(nèi)異癥異位組織中高表達(dá),可能有利于維持腺體細(xì)胞增殖的能量代謝平衡,促進(jìn)內(nèi)異癥的發(fā)生。
3.HIF-1α、GLUT-1在內(nèi)異癥患者異位組織
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