豬MIF基因克隆及表達調(diào)控研究.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、巨噬細胞移動抑制因子(macrophagemigrationinhibitoryfactor，MIF)是發(fā)現(xiàn)能抑制巨噬細胞隨機遷移的關鍵細胞因子，在炎癥反應中發(fā)揮重要作用。本文通過同源序列法，設計擴增基因的特異性引物，利用RT-PCR技術克隆了梅山豬MIF基因全編碼序列及基因組序列：用輻射雜種細胞學技術(RH)對基因進行染色體定位：采用生物信息學和分子生物學技術分析其核苷酸和氨基酸序列；用實時定量PCR方法分析MIF基因的組織表達譜；構(gòu)

2、建基因的真核表達載體并實現(xiàn)了離體細胞超表達。根據(jù)HTGS數(shù)據(jù)庫信息，克隆到豬MIF基因5’側(cè)翼長2000bp的啟動子序列，并用雙熒光素酶報告基因系統(tǒng)檢測豬MIF啟動子活性。通過不同濃度的羅格列酮(10-5×10-5，10-6mol/L)刺激或?qū)cDNA-PPARγ2載體轉(zhuǎn)染NIH3T3成纖維細胞，分析PPARγ2對MIF基因表達調(diào)控的影響。結(jié)果表明：(1)克隆得到梅山豬MIF基因全長編碼區(qū)348bp，編碼115個氨基酸，克隆到兩個內(nèi)含

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