豬脂聯(lián)素基因的染色體定位、克隆、原核表達(dá)、抗血清制備及體內(nèi)表達(dá)調(diào)控研究.pdf

1、脂聯(lián)素是由脂肪組織特異表達(dá)的細(xì)胞因子,分泌后進(jìn)入血液循環(huán),調(diào)節(jié)體內(nèi)能量代謝.脂聯(lián)素球狀區(qū)在體內(nèi)獨(dú)立存在,成脂聯(lián)素功能相似.雖然由脂肪組織特異表達(dá),但是當(dāng)動(dòng)物脂肪過(guò)度沉積時(shí)脂聯(lián)素表達(dá)及血液脂聯(lián)素水平反而下降.另外,2型糖尿病、一些心血管疾病患者中的血液脂聯(lián)素水平很低,而增加體內(nèi)脂聯(lián)素有助于這些疾病的改善.研究證實(shí)脂聯(lián)素能增強(qiáng)胰島素敏感性并有一定的抗炎癥功能.該文以豬為研究對(duì)象,旨在建立豬體內(nèi)脂聯(lián)素表達(dá)量的檢測(cè)方法.首先用RT-PCR擴(kuò)增脂

2、聯(lián)素編碼區(qū)和球狀區(qū),構(gòu)建pGEX-Adiponectin和pGEX-gAdiponectin表達(dá)載體,轉(zhuǎn)化到BL21(DE3)中進(jìn)行表達(dá),得到豬脂聯(lián)素GST融合蛋白及脂聯(lián)素球狀區(qū)GST融合蛋白.然后用重組蛋白免疫新西蘭白兔而產(chǎn)生兔抗豬抗血清.其次建立了半定PCR方法研究瘦肉型和脂肪型豬脂聯(lián)素表達(dá)差異.半定量PCR要求PCR擴(kuò)增在指數(shù)期進(jìn)行,所以先要摸索指數(shù)期循環(huán)數(shù),發(fā)現(xiàn)在25~29個(gè)循環(huán)脂聯(lián)素和β-actin均處于指數(shù)期.以27為最終循