茵陳澤蘭方對急性肝衰竭大鼠肝損傷及肝再生的影響.pdf

1、目的: 觀察茵陳澤蘭方對急性肝衰竭模型動物的防治作用，并在此基礎(chǔ)上觀察其防治急性肝衰竭的作用機(jī)制，為臨床治療急性肝衰竭提供新的思路。 方法: 選取健康清潔級Wistar大鼠110只，雌雄各半，體重200±20 g，隨機(jī)分為6組，即正常組，模型組，促肝細(xì)胞生長素組和茵陳澤蘭方低、中、高劑量組。其中正常組10只，其余各組均為20只。大鼠禁食過夜(14h以上)后，除正常組外，其余各組用硫代乙酰胺(TAA)600mg/k

2、g皮下注射2次(間隔24h)造模；正常組皮下注射同等劑量的生理鹽水。開始至實驗結(jié)束，正常組、模型組和西藥組予生理鹽水5ml/kg灌胃，茵陳澤蘭方低、中、高劑量組分別給等體表面積比的相應(yīng)藥物灌胃(三組分別給予茵陳澤蘭方成人等效劑量、成人等效劑量的5倍、成人等效劑量的10倍劑量進(jìn)行灌胃)。為防止低血糖，造模期間，除西藥組外，所有動物每隔8h皮下注射5ml混合液(3ml 10％葡萄糖、2ml含等量生理鹽水與20μmol/L KCl)；西藥組予

3、促肝細(xì)胞生長素2mg/kg，溶于上述防止低血糖的混合液中，每日皮下注射1次，持續(xù)3d。動物自由飲食。實驗48h后，所有大鼠用3％戊巴比妥鈉腹腔注射，麻醉后取腹中線迅速剪開腹腔，用10ml注射器無菌采取腹主動脈血8ml，常規(guī)分離血清，-20℃凍存?zhèn)錅y。各組隨機(jī)取大鼠9只，取相同部位的肝組織放入10％中性福爾馬林液固定，常規(guī)石臘包埋，切片厚4μm，并取部份肝、腦組織迅速放入液氮中凍存。主要觀察48h內(nèi)各組大鼠行為學(xué)變化、死亡情況和常規(guī)生化方

4、法檢測血清丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(ALT)、天冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(AST)、總膽紅素(TBil)；SABC免疫組織化學(xué)法檢測肝組織肝細(xì)胞增殖細(xì)胞核抗原(PCNA)、肝再生信號調(diào)節(jié)蛋白α1(SIRPα1)水平；雙抗體夾心ELISA法檢側(cè)血清TNF-α和IL-6含量；RT-PCR法檢測肝組織HMGB1、CD14mRNA和腦組織AQP-4mRNA水平。 結(jié)果: 1．造模后動物出現(xiàn)活動進(jìn)食減少，行動變緩，出現(xiàn)昏迷，部分死亡(死亡率為 5

5、5.0％)。中藥組大鼠肝損傷得到較大改觀，有部分大鼠可逐漸恢復(fù)正常。死亡率方面，用藥各組與模型組比較均具有顯著性差異(p<0.01)。病理上，與模型組相比較，茵陳澤蘭方中、高劑量組肝細(xì)胞壞死程度最輕微，其次為西藥組和低劑量組；透射電鏡下殘留肝細(xì)胞病理變化較模型組也輕。造模后，反映大鼠肝功能的血清ALT， AST，Tbil水平均明顯升高，模型組明顯高于正常組，有非常顯著差異(P<0.01)；西藥組及中藥各劑量組較模型組低，統(tǒng)計有顯著性差異

6、(P<0.01)；茵陳澤蘭方中、高劑量組與西藥組均低，組間無差異(P>0.05)；中藥低劑量組與西藥組之間有差異(P<0.01)。降低血氨方面，中西藥各組均有顯效(P<0.01)，但茵陳澤蘭方中、高劑量組較西藥組強(qiáng)(P<0.01)；有效縮短凝血酶原時間方面情況相似，只是西藥組比中藥低劑量組更有效(P<0.05)。 2．正常組大鼠肝組織有絲分裂指數(shù)(MI)極少，造模后大鼠肝組織MI顯著升高(P<0.01)，用藥后各組肝組織有絲分裂

7、有不同程度增加(P<0.01)，以中高劑量組最明顯，分別是模型組的2.6倍和3.1倍。低劑量組有絲分裂指數(shù)最少，與其它各用藥組比有顯著性差異(P<0.05-0.01)。正常組大鼠肝組織內(nèi)僅見少數(shù)增殖細(xì)胞核抗原(PCNA)陽性細(xì)胞，表達(dá)也較弱。造模組大鼠PCNA表達(dá)明顯增加，與正常組大鼠相比差異顯著(P<0.01)；促肝細(xì)胞生長素組PCNA染色也明顯增多，濃度高，表達(dá)范圍廣；茵陳澤蘭方治療后，大鼠肝組織 PCNA 表達(dá)升高，且隨著茵陳澤蘭

8、方劑量的增加表達(dá)增強(qiáng)，與模型組相比，明顯升高(P<0.01-0.05)。但相對于西藥組，中藥低劑量組表達(dá)較少(P<0.01)。 3．正常組大鼠肝組織中，sIRPα1表達(dá)水平較低，模型組和促肝細(xì)胞生長素組大鼠與其相比，差異均顯著(P<0.01)。茵陳澤蘭方治療后，大鼠肝組織sIRPα1表達(dá)升高，高、中、低劑量sIRIα1表達(dá)均明顯高于模型組(P<0.01)。且sIRPα1的表達(dá)隨著茵陳澤蘭方劑量的增加而增加，茵陳澤蘭方中高劑量組與

9、模型組比較有顯著差異(P<0.01)；且與西藥組作用相當(dāng)(P>0.05)；但茵陳澤蘭方低劑量組大鼠肝組織 sIRPα1 陽性表達(dá)雖然比模型組明顯升高(P<0.01)，但不及西藥組及中高劑量組(P<0.05)。 4．大鼠在皮下注射 TAA 造模后，模型組、西藥組和茵陳澤蘭各劑量組血清TNF-α和IL-6含量均較正常組高(P<0.01)；但西藥組和茵陳澤蘭各劑量組較模型組比較則明顯下降，其結(jié)果有顯著性差異(P<0.01)；中藥茵陳澤

10、蘭方低劑量組與西藥組比較有差異(P<0.05)，提示其效果不及西藥組；中高劑量組與西藥組比較有顯著性差異(P<0.01)，提示其效果優(yōu)于西藥組；中藥中高劑量組間比較無顯著性差異(P>0.05)。 5．正常組HMGB1 mRNA表達(dá)很低(0.136)，模型組肝組織HMGB1 mRNA表達(dá)明顯增高(0.429)，與正常組比較有顯著性差異(p<0.01)。應(yīng)用茵陳澤蘭方后，HMGB1 mRNA相對含量明顯下降(0.351，0.246，

11、0.241)，與模型組比，各用藥組均有明顯降低(p<0.05-0.01)，中高劑量比西藥組和低劑量組都要低(p<0.01)。低劑量組效果最差(p<0.01)。 6．正常組AQP-4 mRNA表達(dá)很低，模型組肝組織 AQP-4 mRNA 表達(dá)明顯增高，與正常組比較有顯著性差異(p<0.01)。應(yīng)用茵陳澤蘭方后，AQP-4 mRNA表達(dá)受到了抑制，其相對含量明顯下降(0.472，0.336，0.302)，與模型組比，各用藥組均有明顯

12、降低(p<0.05-0.01)，而中高劑量組相比西藥組和低劑量組都要更低(p<0.05-0.01)。 7．正常組CD14 mRNA表達(dá)很低(0.193)，模型組肝組織CD14 mRNA表達(dá)明顯增高(0.697)，差異顯著(p<0.01)。應(yīng)用茵陳澤蘭方后，CD14 mRNA表達(dá)受到了抑制，其相對含量明顯下降(0.564，0.419，0.306)，與模型組比各用藥組均有明顯降低(p<0.05-0.01)，中、高劑量比西藥組和低劑量

13、組都要低(p<0.01)。 結(jié)論: 1．茵陳澤蘭方對急性肝衰竭模型大鼠肝損傷有較好的防治作用，能在一定程度上恢復(fù)肝功能，改善肝組織病變，降低死亡率。 2．茵陳澤蘭方對模型大鼠急性肝衰竭防治作用的機(jī)制可能是： (1)通過降低TNF-α、IL-6和HMGB1等的水平，平衡炎性細(xì)胞因子的釋放，抑制肝細(xì)胞壞死和凋亡，延緩肝細(xì)胞進(jìn)一步損傷，從而阻斷急性肝衰竭的發(fā)生發(fā)展； (2)提高肝細(xì)胞有絲分裂指數(shù)(MI)