山東地區(qū)雞源大腸桿菌和豬源沙門氏菌耐藥基因bla-,CMY-2-的研究.pdf

1、頭孢菌素類抗生素是治療大腸桿菌和沙門氏菌感染最有效的抗生素之一。然而，隨著抗生素在臨床上的濫用及大量應(yīng)用，耐藥菌株不斷出現(xiàn)，尤其是耐頭孢菌素類抗生素菌株的出現(xiàn)已經(jīng)給動(dòng)物健康及動(dòng)物性食品安全構(gòu)成了極大威脅。相關(guān)研究表明，細(xì)菌對(duì)頭孢菌素類抗生素的主要耐藥機(jī)制是細(xì)菌產(chǎn)生了能夠高效水解頭孢菌素的β-內(nèi)酰胺酶；從世界范圍看，位于細(xì)菌質(zhì)粒上的blaCMY-2基因編碼的AmpCβ-內(nèi)酰胺酶分布最廣泛，造成的危害也最大。本研究利用PCR技術(shù)，從山東省部

2、分地區(qū)分離的雞源大腸桿菌和豬源沙門氏菌中分別檢測(cè)到了耐頭孢菌素類抗生素的blaCMY-2基因，同時(shí)將blaCMY-2陽(yáng)性菌株對(duì)其他若干抗生素的敏感性進(jìn)行了研究，以期為控制耐頭孢菌素類抗生素的菌株引起的雞大腸桿菌病和豬沙門氏菌病提供理論依據(jù)和研究基礎(chǔ)。 本研究共分三個(gè)部分： 第一部分blaCMY-2基因的PCR檢測(cè)及序列分析提取大腸桿菌和沙門氏菌分離株的質(zhì)粒DNA，利用blaCMY-2基因特異性引物對(duì)各菌株進(jìn)行PCR檢測(cè)，

3、結(jié)果表明，126株雞源大腸桿菌中有15株(占11.9％)為blaCMY-2基因陽(yáng)性；156株豬源沙門氏菌中有6株(占3.8％)為blaCMY-2基因陽(yáng)性。另外，根據(jù)GenBank中已發(fā)表的相關(guān)DNA序列，設(shè)計(jì)一對(duì)能擴(kuò)增blaCMY-2基因全序列的引物，對(duì)各陽(yáng)性菌株的blaCMY-2進(jìn)行序列分析，結(jié)果表明，除大腸桿菌分離株JN10的第1026位的胸腺嘧啶(T)突變?yōu)橄汆堰?A)以及沙門氏菌分離株S103的第482位的胸腺嘧啶(T)突變?yōu)榘?/p>

4、嘧啶(C)外，其余菌株的blaCMY-2基因全序列與GenBank中已發(fā)表的相關(guān)blaCMY-2序列的同源性為100％。 第二部分blaCMY-2基因陽(yáng)性菌株耐藥表型檢測(cè)本研究采用CLSI推薦的K-B法和微量肉湯稀釋法分別檢測(cè)了15株blaCMY-2基因陽(yáng)性大腸桿菌和6株blaCMY-2基因陽(yáng)性沙門氏菌對(duì)頭孢類及其他幾種抗生素的敏感性，結(jié)果表明，所有blaCMY-2陽(yáng)性菌株均完全耐受第一代頭孢菌素中的頭孢氨芐、頭孢拉定、頭孢噻吩

5、、頭孢唑啉，第二代頭孢中的頭孢克洛，第三代頭孢中的頭孢克肟；此外，所有菌株對(duì)第二代頭孢中的頭孢呋辛、頭孢孟多中度敏感部分耐藥。另外，上述菌株還耐受氨芐西林、鏈霉素、四環(huán)素、氯霉素、阿莫西林/克拉維酸和甲氧芐啶/磺胺甲噁唑，其中3株大腸桿菌(JN5、JN9和HZ9)耐受第三代頭孢中的頭孢曲松和頭孢他啶，有3株(S90、S103、S121)和4株(S90、S103、S121、S138)沙門氏菌分別耐第三代頭孢中的頭孢曲松和頭孢他啶。但所有分

6、離株均對(duì)第四代頭孢菌素中的頭孢吡肟敏感。本研究表明，上述blaCMY-2陽(yáng)性大腸桿菌和沙門氏菌分離株均為多重耐藥菌株，而且耐藥表型基本一致。 第三部分blaCMY-2基因陽(yáng)性菌株酶型檢測(cè)及該基因的轉(zhuǎn)移性研究本試驗(yàn)采用三維酶抑制試驗(yàn)對(duì)15株blaCMY-2陽(yáng)性大腸桿菌和6株沙門氏菌進(jìn)行β-內(nèi)酰胺酶酶型檢測(cè)；同時(shí)，利用質(zhì)粒接合試驗(yàn)和轉(zhuǎn)化試驗(yàn)對(duì)blaCMY-2基因的轉(zhuǎn)移性進(jìn)行了研究，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，攜帶耐藥基因blaCMY-2的質(zhì)粒不僅能夠