豬源大腸桿菌、沙門(mén)氏菌及葡萄球菌銅抗性與耐藥性的相關(guān)性研究.pdf

1、廣泛傳播的抗菌藥物耐藥基因(antibiotic resistance gene，ARG)，因其可通過(guò)食物鏈傳遞給人類引起公共衛(wèi)生風(fēng)險(xiǎn)，已引起全球關(guān)注。近幾十年來(lái)，高劑量硫酸銅等重金屬鹽和抗菌藥物因其預(yù)防動(dòng)物疾病、促生長(zhǎng)等作用被普遍添加到豬飼料中。這種做法無(wú)疑會(huì)導(dǎo)致抗菌藥物和重金屬隨著糞便的排放源源不斷地釋放到環(huán)境中。本研究調(diào)查、了解浙江省規(guī)模化豬場(chǎng)抗銅菌株的發(fā)生情況，以及探討ARG與重金屬抗性基因之間可能存在的相關(guān)性，旨在保證硫酸銅促

2、生長(zhǎng)效果的基礎(chǔ)上，避免耐藥性的加劇及減少環(huán)境污染，為養(yǎng)豬業(yè)飼料添加劑中銅合理劑量的選擇提供科學(xué)依據(jù)。
　　首先以臨床分離到的130株大腸桿菌、32株沙門(mén)氏菌和11株葡萄球菌為材料，采用美國(guó)臨床和實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)協(xié)會(huì)(Clinical and Laboratory StandardsInstitute，CLSI)推薦的微量肉湯稀釋法開(kāi)展了硫酸銅對(duì)上述細(xì)菌最低抑菌濃度(Minimum Inhibitory Concentrations，MI

3、Cs)的測(cè)定。試驗(yàn)結(jié)果表明，硫酸銅對(duì)各菌株MIC值范圍為8-10 mM。就大腸桿菌而言，49.23％(64/130)對(duì)硫酸銅的耐受高達(dá)8 mM，高于對(duì)硫酸銅耐受7 mM和9 mM的33.85％(44/130)和16.92％(22/130)。此外，仔豬大腸桿菌對(duì)硫酸銅的耐受極顯著高于出欄豬(P＜0.01)，顯著高于生長(zhǎng)肥育豬(P口＜0.05）;針對(duì)沙門(mén)氏菌，68.75％(22/32)對(duì)硫酸銅的耐受高達(dá)8 mM，同樣高于對(duì)硫酸銅耐受7 mM

4、和9 mM的18.75％(6/32)和12.50％(4/32);而對(duì)葡萄球菌，對(duì)硫酸銅耐受為7 mM和8 mM的比例均為45.45％(5/11)，遠(yuǎn)高于對(duì)硫酸銅耐受9mM的9.09％(1/11)。
　　其次，為進(jìn)一步探索銅抗性的分子遺傳基礎(chǔ)及其在基因水平上與耐藥性的關(guān)系，本研究進(jìn)一步采用PCR技術(shù)檢測(cè)抗銅基因(pcoABCDE)和耐藥基因（tetA、tetB、strA、strB、sul2）。試驗(yàn)結(jié)果表明，同時(shí)具有pcoA、pcoB

5、、pcoC、pcoD和pcoE抗銅基因的大腸桿菌，占總檢測(cè)菌株數(shù)的31.5％(41/130);而同時(shí)具有pcoA、pcoB、pcoC、pcoD和pcoE抗銅基因沙門(mén)氏菌為59.4％(19/32)。但臨床分離的葡萄球菌均未檢測(cè)到抗銅基因(0/11)。在41株攜帶抗銅基因的大腸桿菌中發(fā)現(xiàn)，同時(shí)攜帶氨基糖苷類抗生素耐藥基因(strA、strB)或磺胺類抗菌藥物耐藥基因（sul2）的大腸桿菌百分率均在90％以上，而四環(huán)素類抗生素耐藥基因(tet

6、A)只有60％左右。在19株攜帶抗銅基因的沙門(mén)氏菌中，同樣含有氨基糖苷類抗生素耐藥基因（strA、strB）的沙門(mén)氏菌百分率高達(dá)100％，四環(huán)素類抗生素耐藥基因（tetA）次之(＞70％)，磺胺類抗菌藥物耐藥基因(sul2)最低(＜20％)。
　　綜上所述，本研究提示，浙江省規(guī)?；i場(chǎng)中無(wú)論是大腸桿菌、沙門(mén)氏菌還是葡萄球菌均存在不同程度的銅抗性，且三種菌的銅抗性無(wú)顯著性差異。分離自豬不同生長(zhǎng)階段的大腸桿菌對(duì)銅的抗性大小依次為仔豬、