上海地區(qū)豬源大腸桿菌和沙門氏菌的耐藥性及耐藥基因的研究.pdf

1、本試驗(yàn)通過(guò)對(duì)上海地區(qū)四個(gè)區(qū)縣豬場(chǎng)的大腸桿菌和沙門氏菌進(jìn)行耐藥監(jiān)測(cè)，不僅可以掌握耐藥菌株和耐藥基因的分布與變化趨勢(shì)，探明耐藥菌和耐藥基因的演變機(jī)制與傳播模式，對(duì)上海地區(qū)建立統(tǒng)一、規(guī)范的監(jiān)測(cè)標(biāo)準(zhǔn)提供資料和依據(jù)，而且可以指導(dǎo)本地區(qū)的養(yǎng)殖業(yè)主的合理使用抗菌藥物，減少抗菌藥物耐藥性的傳播，確定遏制細(xì)菌耐藥性傳播措施的可靠性和有效性，幫助有關(guān)研究機(jī)構(gòu)和制藥公司有目的地開(kāi)發(fā)新的抗菌藥。
　　 1.大腸桿菌和沙門氏菌的分離培養(yǎng)與鑒定對(duì)從豬場(chǎng)采集

2、的糞便樣品通過(guò)選擇性培養(yǎng)基選擇培養(yǎng)，TSI試驗(yàn)及細(xì)菌自動(dòng)鑒定儀進(jìn)行鑒定，結(jié)果表明:414個(gè)樣品中分離鑒定出371株大腸桿菌，35株沙門氏菌，分離率分別為為89.6％，10.9％。大腸桿菌的分離率顯著高于沙門氏菌。
　　 2.大腸桿菌和沙門氏菌的耐藥性分析豬場(chǎng)分離的大腸桿菌和沙門氏菌對(duì)13種養(yǎng)殖業(yè)中常用的抗菌藥物的進(jìn)行耐藥性的研究，耐藥結(jié)果表明:大腸桿菌對(duì)氨芐西林、大觀霉素、復(fù)方新諾明、強(qiáng)力霉素、四環(huán)素、磺胺異噁唑耐藥率較高，最低

3、的耐藥率也達(dá)到了74.7％。大腸桿菌的多重耐藥率達(dá)到了95.82％，大部分集中在6～10種抗菌藥物的耐藥;沙門氏菌對(duì)氟苯尼考耐藥率較高，但對(duì)多粘菌素E則較為敏感，其中對(duì)多粘菌素E的耐藥率僅為11.4％。
　　 3.實(shí)時(shí)熒光定量PCR對(duì)產(chǎn)ESBLs的大腸桿菌基因型的檢測(cè)方法的建立采用臨床和實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)化研究所(CLSI)推薦的ESBLs初篩、確證試驗(yàn)方法（微量肉湯稀釋法），對(duì)從上述實(shí)驗(yàn)分離到的大腸桿菌進(jìn)行ESBLs的檢測(cè)，通過(guò)NCB

4、I上公布的ESBLs的四個(gè)基因型TEM、CTX-M、SHV、OXA的序列設(shè)計(jì)熒光探針的引物，建立起一種快速檢測(cè)ESBLs的熒光定量PCR的方法。結(jié)果顯示，選擇0.5μmol/L作為最佳引物濃度，選擇0.1μmol/L作為探針的最佳濃度。在重復(fù)性試驗(yàn)中四個(gè)基因型的五個(gè)不同稀釋濃度的變異系數(shù)均為超過(guò)1.5％，說(shuō)明重復(fù)性較好。本試驗(yàn)的擴(kuò)增檢測(cè)限為101拷貝/μ/L，遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于普通PCR的104拷貝/μ/L，標(biāo)準(zhǔn)曲線的線性相關(guān)系數(shù)R2＞0.99。

5、本試驗(yàn)可用ESBLs四個(gè)基因型的檢測(cè)。
　　 4.沙門氏菌分子分型的研究應(yīng)用Ribo-PrinterMicrobial Characterization System(RP)PVUⅡ?qū)ι鲜龇蛛x得到的35株沙門菌進(jìn)行DNA指紋圖譜的測(cè)定，并且統(tǒng)計(jì)實(shí)驗(yàn)菌株相互之間的相似性關(guān)系。35株沙門氏菌中，檢測(cè)出1株豬霍亂沙門氏菌，1株阿格納沙門氏菌，檢測(cè)率分別為2.9％，分別只有一個(gè)RP型;15株腸炎沙門氏菌，檢測(cè)率為42.9％，被分成5個(gè)R