雞源性大腸桿菌耐藥性檢測(cè)及相關(guān)耐藥基因的研究.pdf

1、雞大腸桿菌病是由致病性大腸埃希菌(E.coli)引起的傳染病，給養(yǎng)雞業(yè)造成嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失。本實(shí)驗(yàn)室對(duì)其進(jìn)行耐藥性和耐藥基因的檢測(cè)，以期為禽病臨床提供理論依據(jù)。
　　 自河北省各地區(qū)典型大腸桿菌病癥狀的病、死雞中分離出160株細(xì)菌，通過(guò)形態(tài)學(xué)、生化特性及PCR技術(shù)進(jìn)行鑒定，確定其中111株為E.coli。參照NCCLS推薦的K-B藥敏紙片法對(duì)111株E.coli分離株進(jìn)行24種常用抗菌藥物的敏感性試驗(yàn)，結(jié)果如下，(1)對(duì)氨基糖苷類(lèi)

2、藥物鏈霉素、卡那霉素、慶大霉素、新霉素、阿米卡星和壯觀霉素的耐藥率依次為97.30％、96.97％、95.50％、50.45％、45.95％和22.52％;(2)對(duì)喹諾酮類(lèi)藥物氧氟沙星、恩諾沙星、環(huán)丙沙星、鹽酸左氧、諾氟沙星和加替沙星的耐藥率依次為99.10％、95.50％、93.69％、91.89％、90.09％和76.58％;(3)對(duì)β-內(nèi)酰胺類(lèi)藥物頭孢拉定、頭孢噻肟、青霉素、氨芐舒巴坦和頭孢曲松鈉的耐藥率依次為100％、100％、

3、100％、94.59％和90.09％;(4)對(duì)大環(huán)內(nèi)脂類(lèi)藥物紅霉素、替米考星、阿奇霉素的耐藥率依次為99.09％、96.40％和57.66％;(5)對(duì)林可霉素、利福平、強(qiáng)力霉素和氟苯尼考的耐藥率分別為100.00％、100.00％、90.09％和81.98％。統(tǒng)計(jì)結(jié)果顯示我省雞源E.coli分離株100％呈多重耐藥性，耐藥現(xiàn)象嚴(yán)重。
　　 采用PCR方法，對(duì)111株E.coli分離株進(jìn)行6種氨基糖苷類(lèi)耐藥(AMEs)基因的檢測(cè)。

4、結(jié)果顯示，共有100(90.09％)株擴(kuò)增出AMEs基因，6種基因aph(6')-Id(strB)、ant(3')-Ia(aadA)、aac(3)-Ⅱa、aac(6')-Ib、aph(3')-Ⅱa、aph(3')-Ib(strA)的陽(yáng)性率依次為73.87％、41.44％、31.53％、26.13％、13.51％和8.11％。在111株中有11株為所測(cè)AMEs基因陰性，未見(jiàn)6種基因全攜帶者。
　　 采用PCR方法，對(duì)111株E.c

5、oli分離株進(jìn)行4種喹諾酮類(lèi)耐藥質(zhì)粒的檢測(cè)。結(jié)果顯示，共有100(90.09％)株擴(kuò)增出耐藥質(zhì)粒，qnrA、qnrB、qnrS、aac(6')-Ib-cr的陽(yáng)性率分別為0％(0/111)、0.90％(1/111)、8.11％(9/111)、36.04％(40/111)。對(duì)其中40株E.coliGyrA基因中的氟酮耐藥決定區(qū)(Quinolone-resisitantdeterminingregion，QRDR)進(jìn)行PCR檢測(cè)、測(cè)序、并進(jìn)行

6、序列分析，結(jié)果40株耐藥菌中，QRDR基因在其編碼的第83或/和87位氨基酸均發(fā)生突變，但在所檢測(cè)菌株中未發(fā)現(xiàn)72、75位氨基酸突變的存在。GyrA基因突變?yōu)榇竽c桿菌耐喹諾酮類(lèi)抗生素的一個(gè)重要機(jī)制。
　　 采用PCR方法，對(duì)111株E.coli分離株進(jìn)行β-內(nèi)酰胺類(lèi)耐藥基因的檢測(cè)。結(jié)果顯示，Oxa-1、Oxa-3、Oxa-5的陽(yáng)性率分別為0％(0/111)、2.7％(3/111)及0.9％(1/111)，可見(jiàn)Oxa型β-內(nèi)酰胺酶