鐵皮石斛體細(xì)胞胚胎成熟培養(yǎng)初步研究.pdf

1、由于植物體細(xì)胞胚胎與合子胚胎的成熟發(fā)育在貯藏物質(zhì)積累、脫水耐受性的獲得以及成熟休眠的確立上都存在巨大的不同，因此，為了更好地研究胚胎成熟機理以及進一步優(yōu)化體細(xì)胞胚胎發(fā)生體系，有必要對體細(xì)胞胚胎的成熟發(fā)育進行誘導(dǎo)。研究表明，在培養(yǎng)基中添加脫落酸(ABA)可以誘導(dǎo)體胚成熟發(fā)育的啟動，而進一步提高體胚培養(yǎng)環(huán)境中碳源含量以及滲透壓則有利于體胚積累貯藏物質(zhì)、獲得脫水耐受性，再經(jīng)過一段時間的緩慢脫水就可以誘導(dǎo)體胚進入成熟休眠。 本文以從開始

2、分化的鐵皮石斛(Dendrobium candidum Wall ex Lindl)胚性愈傷組織中分離的體細(xì)胞胚胎為材料，研究了在液體培養(yǎng)條件下，不同濃度的蔗糖、聚乙二醇-4000(PEG-4000)和脫落酸(ABA)對鐵皮石斛體細(xì)胞胚胎發(fā)育的調(diào)控作用。結(jié)果表明，當(dāng)蔗糖為5％時，有68.9％的體細(xì)胞胚胎發(fā)育正常；在PEG處理條件下，僅有33.0％的體細(xì)胞胚胎發(fā)育正常，其余體胚則展現(xiàn)出一定的異常如體胚形狀不規(guī)則以及呈半透明狀等；當(dāng)培養(yǎng)基中

3、添加0.76μMABA時可獲得對體胚的最佳調(diào)控效果，有84.5％的體細(xì)胞胚胎發(fā)育正常。 另外，本文還進一步研究了不同濃度的蔗糖、聚乙二醇-4000(PEG-4000)以及脫落酸(ABA)在液體培養(yǎng)條件下對鐵皮石斛體胚中可溶性蛋白積累的影響。結(jié)果表明：(1)在培養(yǎng)基中添加較高濃度(5％、7.5％)的蔗糖有利于體胚積累可溶性蛋白，可溶性蛋白最高含量可達573ug/g，但是過高的蔗糖濃度(10％)則不利用可溶性蛋白的積累；(2)PEG

4、對體胚可溶性蛋白的積累僅在添加較低濃度(2％)時有利，高濃度表現(xiàn)為抑止；(3)ABA對鐵皮石斛體胚中可溶性蛋白積累的最適濃度為0.15mg/L，較低(0.10mg/L)或較高(0.20mg/L)的ABA濃度則不利用體胚對可溶性蛋白的積累。本實驗的最佳結(jié)果出現(xiàn)在7.5％蔗糖與0.56uMABA組合中，該條件下體胚中可溶性蛋白含量為740.6ug/g。 結(jié)論：本實驗結(jié)果表明，采用較高濃度的蔗糖組合一定濃度的ABA有利于鐵皮石斛體細(xì)胞