甘薯體細(xì)胞胚胎再生及遺傳轉(zhuǎn)化的初步研究.pdf

1、建立一個(gè)有效的再生體系,是遺傳轉(zhuǎn)化成功的必備條件.與其它植物相比,甘薯是一種再生比較困難的植物.甘薯的再生頻率基因型間差異很大,尚未建立一個(gè)基因型適用性較廣的植株再生系統(tǒng).甘薯有1100多個(gè)品種,目前被研究過(guò)的不過(guò)數(shù)十種,報(bào)道有較高植株再生頻率并成功進(jìn)行遺傳轉(zhuǎn)化的甘薯材料僅十余種,如"Jewel"、"White Star"、"栗子香"、"高系14"等.絕大多數(shù)甘薯主栽品種的再生頻率很低.因而,雖然甘薯的基因工程研究取得了一定的進(jìn)展,但甘

2、薯至今沒(méi)有一例轉(zhuǎn)基因植株進(jìn)入商品化的應(yīng)用.向甘薯基因組中導(dǎo)入外源基因的方法有多種,其中農(nóng)桿菌介導(dǎo)法最為有效,轉(zhuǎn)入的外源基因多以單拷貝插入,便于育種工作的利用.川薯34,是西南地區(qū)的一個(gè)優(yōu)良主栽品種.該試驗(yàn)建立了川薯34等品種較高頻率的體細(xì)胞胚胎再生體系.在此基礎(chǔ)上,利用GUS-intron融合基因的瞬時(shí)表達(dá),研究了川薯34有效的遺傳轉(zhuǎn)化條件,為進(jìn)一步通過(guò)基因工程改良其品質(zhì)奠定了良好的基礎(chǔ).主要實(shí)驗(yàn)結(jié)果如下:1.通過(guò)對(duì)不同植物激素組合及甘

3、薯不同再生途徑的比較試驗(yàn),建立了3個(gè)甘薯基因型較高頻率的體細(xì)胞胚胎再生體系,其中川薯34、川薯8129-4、徐薯18的最高植株再生率分別達(dá)到了49.9％、29.7％、14.7％.2.從川薯34的體胚苗中,篩選出了L22、L8兩個(gè)高頻體胚發(fā)生材料,可以為遺傳轉(zhuǎn)化工作提供良好的受體.3.通過(guò)GUS-intron融合基因的瞬時(shí)表達(dá),確定了川薯34有效的遺傳轉(zhuǎn)化條件.優(yōu)化后的遺傳轉(zhuǎn)化條件為:用O.D.值為0.5的農(nóng)桿菌LBA4404/pIG12