維生素E對(duì)高糖誘導(dǎo)人腹膜間皮細(xì)胞纖維連結(jié)蛋白表達(dá)及活性氧生成的影響.pdf

1、目的：腹膜間皮細(xì)胞是構(gòu)成腹膜最主要的細(xì)胞群體，它在維持腹膜結(jié)構(gòu)的完整性和功能的有效性中起著重要的作用，腹膜結(jié)構(gòu)的完整與功能的穩(wěn)定是長(zhǎng)期維持性腹膜透析(continuous ambulatory peritonealldialysis，cAPD)治療的基礎(chǔ)。長(zhǎng)期腹膜透析治療可誘導(dǎo)腹膜間皮細(xì)胞損傷，進(jìn)而促進(jìn)腹膜纖維化的形成，最終導(dǎo)致腹透超濾失敗，從而迫使患者退出腹膜透析治療，因此CAPD相關(guān)腹膜纖維化的防治成為了當(dāng)前國(guó)內(nèi)外學(xué)者研究的重點(diǎn)。本

2、研究擬探討高糖是否刺激體外培養(yǎng)的人腹膜間皮細(xì)胞(human peritoneal mesothelial cells，HPMCs)發(fā)生氧化應(yīng)激損傷生成活性氧(reactive oxygen species，ROS)及對(duì)纖維連接蛋白(fibronectin，F(xiàn)N)表達(dá)的影響，同時(shí)應(yīng)用不同濃度的維生素E作為藥物對(duì)照來(lái)觀察其在HPMCs發(fā)生氧化應(yīng)激損傷下的保護(hù)作用，為腹膜纖維化的防治提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。 方法：從CAPD治療的慢性腎臟病患者

3、腹膜透析流出液中分離并在含10﹪胎牛血清的RPMI 1640培養(yǎng)基中原代培養(yǎng)人腹膜間皮細(xì)胞，第二代細(xì)胞應(yīng)用免疫組化方法進(jìn)行細(xì)胞鑒定，第三代細(xì)胞用于實(shí)驗(yàn)。分別按照不同的實(shí)驗(yàn)要求分成濃度依賴(lài)組、藥物干預(yù)組。采用ELISA法檢測(cè)HPMCs上清液中FN蛋白水平，采用逆轉(zhuǎn)錄多聚酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(RT-PCR)半定量分析HPMCs中FNmRNA的基因表達(dá)，同時(shí)應(yīng)用流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)對(duì)氧化劑敏感的2，7-二氫二氯熒光素(DCFH)發(fā)生氧化所產(chǎn)生的熒光量，

4、從而間接的反映細(xì)胞內(nèi)ROS的水平。分別用三種不同濃度的抗氧化劑維生素E(12.5μmol/L、25μmol/L、50μmol/L)預(yù)處理細(xì)胞，觀察其對(duì)HPMCs內(nèi)源性ROS生成及FN表達(dá)的影響。 1.高糖能顯著誘導(dǎo)體外培養(yǎng)的人腹膜間皮細(xì)胞FN的分泌與基因表達(dá)，呈濃度依賴(lài)方式(P<0.01)，其中4.25﹪葡萄糖組(高糖組)誘導(dǎo)人腹膜間皮細(xì)胞FN的分泌與基因表達(dá)更加明顯。 2.高糖可明顯刺激體外培養(yǎng)的人腹膜間皮細(xì)胞內(nèi)活性氧

5、(ROS)的生成，呈濃度依賴(lài)方式(P<0.01)，在30min測(cè)定平均熒光強(qiáng)度，其中4.25﹪葡萄糖組(高糖組)刺激人腹膜間皮細(xì)胞ROS生成量最高。 3.分別用三種不同濃度的抗氧化劑維生索E預(yù)處理細(xì)胞，與空白對(duì)照組相比，可明顯地降低細(xì)胞內(nèi)ROS的生成量，同時(shí)顯著地抑制FN的分泌與基因表達(dá)，呈劑量依賴(lài)方式(P<0.01)，其中維生素E(50μmol/L)組抑制更加明顯。 結(jié)論： 1.高糖可誘導(dǎo)體外培養(yǎng)的人腹膜間皮細(xì)