熱應(yīng)激對體外小鼠早期囊胚發(fā)育能力及超微結(jié)構(gòu)影響的研究.pdf

1、以雌性昆明種小鼠為試驗(yàn)動物，經(jīng)PMSG-hCG超數(shù)排卵后，收集受精卵，進(jìn)行體外培養(yǎng)。當(dāng)胚胎發(fā)育至早期囊胚時(shí)，按照下列方式處理:(1)將體外培養(yǎng)至早期囊胚的小鼠胚胎分別施以溫和熱應(yīng)激(39℃，2h)和強(qiáng)烈熱應(yīng)激處理(41℃，2h)，熱應(yīng)激結(jié)束后在37℃下繼續(xù)培養(yǎng);對照組在37℃下連續(xù)培養(yǎng)。在體視顯微鏡下觀察熱應(yīng)激后24h時(shí)早期囊胚發(fā)育到擴(kuò)張囊胚的比率和熱應(yīng)激后48h時(shí)早期囊胚發(fā)育到孵化囊胚的比率;利用早期胚胎總細(xì)胞計(jì)數(shù)法，統(tǒng)計(jì)熱應(yīng)激后24

2、h時(shí)早期囊胚發(fā)育到擴(kuò)張囊胚的平均總細(xì)胞數(shù)及熱應(yīng)激后48h時(shí)早期囊胚發(fā)育到孵化囊胚的平均總細(xì)胞數(shù)。(2)將體外培養(yǎng)至早期囊胚的小鼠胚胎分別施以溫和熱應(yīng)激(39℃，2h)和強(qiáng)烈熱應(yīng)激(41℃，2h)處理，分別在熱應(yīng)激后0h和2h時(shí)，收集胚胎，制作超薄切片;對照紐胚胎處理方式同熱應(yīng)激組。利用電子顯微鏡技術(shù)，觀察不同強(qiáng)度熱應(yīng)激組和對照組胚胎及熱應(yīng)激后胚胎不經(jīng)恢復(fù)和恢復(fù)2h時(shí)的超微結(jié)構(gòu)變化。試驗(yàn)結(jié)果如下:
　　 1.熱應(yīng)激對小鼠早期囊胚發(fā)

3、育能力的影響
　　 體外培養(yǎng)的小鼠早期囊胚在41℃、6％CO2條件下熱應(yīng)激處理2h，小鼠早期囊胚發(fā)育到擴(kuò)張囊胚（63.3±3.6％）和孵化囊胚（49.4±9.3％）的比率顯著降低(P＜0.05)，而在39℃、5.5％CO2條件下熱應(yīng)激處理2h的小鼠早期囊胚發(fā)育到擴(kuò)張囊胚（80.8±6.4％）和孵化囊胚（79.7±5.6％）的比率與對照組小鼠早期囊胚發(fā)育到擴(kuò)張囊胚（81.7±6.5％）和孵化囊胚（77.2±5.0％）的比率差異不顯

4、著(P＞0.05)。與對照組小鼠早期囊胚發(fā)育到擴(kuò)張囊胚的平均總細(xì)胞數(shù)（57.11±1.7）相比，39℃熱應(yīng)激組（49.89±1.3）和41℃熱應(yīng)激組（42.22±2.0）小鼠早期囊胚發(fā)育到擴(kuò)張囊胚的平均總細(xì)胞數(shù)均顯著降低(P＜0.05)，但39℃熱應(yīng)激組（71.27±0.5）和41℃熱應(yīng)激組（71.89±1.8）小鼠早期囊胚發(fā)育到孵化囊胚的平均總細(xì)胞數(shù)與對照組（73.09±0.6）小鼠早期囊胚發(fā)育到孵化囊胚的平均總細(xì)胞教之間差異不顯著(

5、P＞0.05)。
　　 2.熱應(yīng)激對小鼠早期囊胚超微結(jié)構(gòu)形態(tài)的影響
　　 在37℃正常培養(yǎng)的小鼠早期囊胚中，胞漿含有豐富的線粒體和內(nèi)質(zhì)網(wǎng)及少量的溶酶體;粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)上有大量的顆粒狀的核糖體附著;細(xì)胞核內(nèi)以常染色質(zhì)為主，核仁大而松散;細(xì)胞連接緊密、結(jié)構(gòu)完整;卵周隙狹窄。
　　 39℃熱應(yīng)激組小鼠早期囊胚的線粒體發(fā)生輕微腫脹，內(nèi)質(zhì)網(wǎng)略有擴(kuò)張，部分核糖體從粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)上脫落;核周間隙稍有增大。經(jīng)37℃恢復(fù)培養(yǎng)2h，上述異常

6、細(xì)胞器已修復(fù)。
　　 41℃熱應(yīng)激組小鼠早期囊胚線粒體高度腫脹，粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)上的核糖體脫落嚴(yán)重，滑面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)和溶酶體增多;卵周間隙和核周間隙明顯增大;核仁的纖維部和顆粒部分離，異染色質(zhì)增多;橋粒連接結(jié)構(gòu)被破壞，胞漿出現(xiàn)異常物質(zhì)。熱應(yīng)激后經(jīng)37℃恢復(fù)培養(yǎng)2h，損傷的細(xì)胞器沒有得到修復(fù)。
　　 以上結(jié)果說明，39℃溫和熱應(yīng)激2h未對小鼠早期囊胚的發(fā)育能力和細(xì)胞器超微結(jié)構(gòu)形態(tài)產(chǎn)生明顯的影響。41℃強(qiáng)烈熱應(yīng)激2h對小鼠早期囊胚發(fā)育具