馬卵母細(xì)胞ICSI后體外發(fā)育能力及妊娠后期卵巢黃體組織超微結(jié)構(gòu)的研究.pdf

1、馬胚胎移植及卵母細(xì)胞胞質(zhì)內(nèi)精子注射技術(shù)在國(guó)外均已取得突破性進(jìn)展，我國(guó)為養(yǎng)馬大國(guó)，肉馬、乳馬和賽馬業(yè)市場(chǎng)雖然廣闊，但良種馬數(shù)量缺口很大，利用新繁殖技術(shù)如胚胎移植、體外受精是解決馬繁殖率低和加速品種改良的有效途徑。 本試驗(yàn)從屠宰場(chǎng)采集馬卵巢，系統(tǒng)研究妊娠和空懷卵巢，以及不同卵巢狀態(tài)對(duì)卵巢重量、形態(tài)和卵泡分布的影響。用采集到的卵母細(xì)胞為材料，評(píng)估卵丘形態(tài)(松散型或致密型)、成熟培養(yǎng)體系(TCM199或NCSU23)、體外成熟時(shí)間(34

2、h或38h)以及離子霉素結(jié)合6-DMAP激活對(duì)馬卵母細(xì)胞胞質(zhì)內(nèi)精子注射(ICSI)后體外發(fā)育能力的影響。本試驗(yàn)還對(duì)妊娠后期(7月～9月)馬卵巢黃體的超微結(jié)構(gòu)進(jìn)行了研究。 非繁殖季節(jié)馬卵巢形態(tài)及卵泡分布的研究結(jié)果表明：(1)妊娠和空懷馬卵巢的重量和形態(tài)，以及大、中、小卵泡數(shù)均無(wú)顯著差異(P>0.05)；(2)卵巢狀態(tài)對(duì)馬卵巢重量無(wú)顯著影響(P>0.05)；(3)有1個(gè)大卵泡的馬卵巢的中卵泡數(shù)顯著高于無(wú)大卵泡卵巢(P<0.05)。大

3、卵泡數(shù)與小卵泡數(shù)呈負(fù)線性相關(guān)(r=-0.255，P=0.000)；(4)馬在非繁殖季節(jié)有20mm以上大卵泡的卵巢占總卵巢數(shù)的19.02％，平均每個(gè)卵巢共有4.65個(gè)卵泡，大、中、小卵泡分別占卵巢總卵泡數(shù)的9.00％、24.18％和66.82％。 馬妊娠后期黃體組織超微結(jié)構(gòu)的研究結(jié)果表明：(1)大黃體細(xì)胞(LLC)呈群狀或索狀分布，細(xì)胞多呈圓形或橢圓形，體積較大。小黃體細(xì)胞(SLC)呈梭形或多邊形，體積??；(2)細(xì)胞間質(zhì)存在豐富的

4、膠原纖維?？捎^察到部分分泌顆粒，脂滴較多，線粒體、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)、溶酶體較少；(3)黃體細(xì)胞質(zhì)內(nèi)多數(shù)細(xì)胞器崩解，黃體細(xì)胞呈現(xiàn)明顯的退化，孕激素水平的維持不再依靠黃體；(4)在3000×的五個(gè)視野內(nèi)，LLC占黃體細(xì)胞的26.06％，SLC占黃體細(xì)胞的73.94％；(5)LLC的細(xì)胞長(zhǎng)徑平均為6.45μm，短徑平均為3.29μm，SLC的細(xì)胞長(zhǎng)徑平均為3.67μm，短徑平均為1.67μm；(6)LLC的核長(zhǎng)徑平均為5.06μm，核短徑平均為2.64

5、μm，SLC的核長(zhǎng)徑平均為3.51μm，核短徑平均為1.59μm。 馬卵母細(xì)胞ICSI后體外發(fā)育能力的研究結(jié)果表明：(1)馬松散型卵母細(xì)胞成熟率顯著高于致密型卵母細(xì)胞(P<0.05，分別為61.09％和41.24％)，但I(xiàn)CSI后36h分裂率無(wú)顯著差異(P>0.05，分別為47.34％和44.92％)；(2)兩種培養(yǎng)體系對(duì)馬松散型或致密型卵母細(xì)胞成熟率以及ICSI后36h分裂率無(wú)顯著影響(P>0.05)，但相同成熟體系培養(yǎng)松散型

6、卵母細(xì)胞成熟率均顯著高于致密型卵母細(xì)胞(P<0.05)，然而ICSI后36h分裂率差異不顯著(P>0.05)；(3)卵母細(xì)胞38h成熟率顯著高于34h成熟率(P<0.05)，分別為44.43％～68.87％和34.52％～58.90％)，松散型卵母細(xì)胞在TCM199體系中成熟34h進(jìn)行ICSI后36h分裂率顯著高于松散型或致密型卵母細(xì)胞在NCSU23體系中成熟38h后進(jìn)行ICSI的分裂率(P<0.05)；(4)ICSI后用離子霉素結(jié)合6