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文檔簡介
1、馬胚胎移植及卵母細胞胞質(zhì)內(nèi)精子注射技術在國外均已取得突破性進展,我國為養(yǎng)馬大國,肉馬、乳馬和賽馬業(yè)市場雖然廣闊,但良種馬數(shù)量缺口很大,利用新繁殖技術如胚胎移植、體外受精是解決馬繁殖率低和加速品種改良的有效途徑。 本試驗從屠宰場采集馬卵巢,系統(tǒng)研究妊娠和空懷卵巢,以及不同卵巢狀態(tài)對卵巢重量、形態(tài)和卵泡分布的影響。用采集到的卵母細胞為材料,評估卵丘形態(tài)(松散型或致密型)、成熟培養(yǎng)體系(TCM199或NCSU23)、體外成熟時間(34
2、h或38h)以及離子霉素結(jié)合6-DMAP激活對馬卵母細胞胞質(zhì)內(nèi)精子注射(ICSI)后體外發(fā)育能力的影響。本試驗還對妊娠后期(7月~9月)馬卵巢黃體的超微結(jié)構(gòu)進行了研究。 非繁殖季節(jié)馬卵巢形態(tài)及卵泡分布的研究結(jié)果表明:(1)妊娠和空懷馬卵巢的重量和形態(tài),以及大、中、小卵泡數(shù)均無顯著差異(P>0.05);(2)卵巢狀態(tài)對馬卵巢重量無顯著影響(P>0.05);(3)有1個大卵泡的馬卵巢的中卵泡數(shù)顯著高于無大卵泡卵巢(P<0.05)。大
3、卵泡數(shù)與小卵泡數(shù)呈負線性相關(r=-0.255,P=0.000);(4)馬在非繁殖季節(jié)有20mm以上大卵泡的卵巢占總卵巢數(shù)的19.02%,平均每個卵巢共有4.65個卵泡,大、中、小卵泡分別占卵巢總卵泡數(shù)的9.00%、24.18%和66.82%。 馬妊娠后期黃體組織超微結(jié)構(gòu)的研究結(jié)果表明:(1)大黃體細胞(LLC)呈群狀或索狀分布,細胞多呈圓形或橢圓形,體積較大。小黃體細胞(SLC)呈梭形或多邊形,體積??;(2)細胞間質(zhì)存在豐富的
4、膠原纖維??捎^察到部分分泌顆粒,脂滴較多,線粒體、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)、溶酶體較少;(3)黃體細胞質(zhì)內(nèi)多數(shù)細胞器崩解,黃體細胞呈現(xiàn)明顯的退化,孕激素水平的維持不再依靠黃體;(4)在3000×的五個視野內(nèi),LLC占黃體細胞的26.06%,SLC占黃體細胞的73.94%;(5)LLC的細胞長徑平均為6.45μm,短徑平均為3.29μm,SLC的細胞長徑平均為3.67μm,短徑平均為1.67μm;(6)LLC的核長徑平均為5.06μm,核短徑平均為2.64
5、μm,SLC的核長徑平均為3.51μm,核短徑平均為1.59μm。 馬卵母細胞ICSI后體外發(fā)育能力的研究結(jié)果表明:(1)馬松散型卵母細胞成熟率顯著高于致密型卵母細胞(P<0.05,分別為61.09%和41.24%),但ICSI后36h分裂率無顯著差異(P>0.05,分別為47.34%和44.92%);(2)兩種培養(yǎng)體系對馬松散型或致密型卵母細胞成熟率以及ICSI后36h分裂率無顯著影響(P>0.05),但相同成熟體系培養(yǎng)松散型
6、卵母細胞成熟率均顯著高于致密型卵母細胞(P<0.05),然而ICSI后36h分裂率差異不顯著(P>0.05);(3)卵母細胞38h成熟率顯著高于34h成熟率(P<0.05),分別為44.43%~68.87%和34.52%~58.90%),松散型卵母細胞在TCM199體系中成熟34h進行ICSI后36h分裂率顯著高于松散型或致密型卵母細胞在NCSU23體系中成熟38h后進行ICSI的分裂率(P<0.05);(4)ICSI后用離子霉素結(jié)合6
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