人卵子體外成熟中超微結(jié)構(gòu)及細(xì)胞凋亡與卵子發(fā)育潛能關(guān)系的研究.pdf

1、該工作主要對(duì)IVM中培養(yǎng)前后的卵子及胚胎進(jìn)行評(píng)分,并評(píng)估所采用的評(píng)分標(biāo)準(zhǔn);通過(guò)對(duì)卵子周?chē)穆亚鸺?xì)胞凋亡狀況進(jìn)行檢測(cè),探討卵丘細(xì)胞的凋亡程度與卵母細(xì)胞發(fā)育潛能的關(guān)系,以期根據(jù)卵子和胚胎形態(tài)學(xué)評(píng)分及卵丘細(xì)胞凋亡檢測(cè)結(jié)果選擇移植胚胎,提高體外受精-胚胎移植(in vitro fertilization pre-embryo transfer,IVF-ET)的臨床妊娠率.研究了光鏡下形態(tài)良好與較差的卵母細(xì)胞的超微結(jié)構(gòu),并檢測(cè)了其相應(yīng)的卵丘細(xì)胞的

2、凋亡率,總結(jié)了人卵母細(xì)胞充分成熟的超微結(jié)構(gòu)特征及發(fā)育不良卵子的超微結(jié)構(gòu)變化,為確定人卵母細(xì)胞體外成熟和體外受精最佳時(shí)期提供形態(tài)學(xué)資料,同時(shí)試圖揭示人卵母細(xì)胞體外成熟過(guò)程中異常發(fā)育的形態(tài)學(xué)變化,希望能為卵母細(xì)胞發(fā)育調(diào)控機(jī)理方面的研究提供形態(tài)學(xué)資料.一、為了更好的指導(dǎo)臨床工作,制定了"改良式人未成熟卵母細(xì)胞評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)",對(duì)IVM中所取卵子進(jìn)行培養(yǎng)前和培養(yǎng)后兩次評(píng)分,同時(shí)記錄卵子受精情況及胚胎發(fā)育情況,進(jìn)行胚胎評(píng)分.統(tǒng)計(jì)資料表明,我們采用的卵子

3、及胚胎評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)具有可行性,即評(píng)分差的卵子發(fā)育潛能不良;評(píng)分好的卵子發(fā)育潛能良好,對(duì)臨床具有指導(dǎo)意義.二、對(duì)卵丘細(xì)胞凋亡率進(jìn)行檢測(cè),首次系統(tǒng)評(píng)價(jià)了卵丘細(xì)胞凋亡率與卵子發(fā)育潛能之間的關(guān)系.1.用H.E染色、DAPI染色和TUNEL檢測(cè)對(duì)卵丘細(xì)胞的凋亡進(jìn)行形態(tài)學(xué)研究,分辨正常卵丘細(xì)胞和凋亡卵丘細(xì)胞.統(tǒng)計(jì)卵丘細(xì)胞的凋亡率,并用SPSS分析軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析.分析結(jié)果表明,卵丘細(xì)胞凋亡率高的卵母細(xì)胞發(fā)育潛能差,卵丘細(xì)胞凋亡率低的卵母細(xì)胞發(fā)育潛能好

4、,移植并妊娠的卵母細(xì)胞其卵丘細(xì)胞凋亡率最低.從卵丘細(xì)胞凋亡率的統(tǒng)計(jì)結(jié)果來(lái)看,用胚胎評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)分類(lèi)比用卵子評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)分類(lèi)更能反應(yīng)卵母細(xì)胞的發(fā)育潛能.故結(jié)合形態(tài)學(xué)標(biāo)準(zhǔn)與卵丘細(xì)胞凋亡情況,選擇可移植的胚胎,能夠提高移植胚胎的妊娠率.2.按卵子評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)將卵子分為兩類(lèi):一類(lèi)為優(yōu)質(zhì)卵子,另一類(lèi)為不良卵子,分別提取其卵丘細(xì)胞的DNA,進(jìn)行瓊脂糖凝膠電泳.結(jié)果表明:優(yōu)質(zhì)卵子卵丘細(xì)胞凋亡程度輕,不良卵子的卵丘細(xì)胞其DNA在電泳時(shí)形成特征性的DNAladder