唑來膦酸對(duì)牙齦成纖維細(xì)胞增殖凋亡的影響.pdf

1、目的:
　　雙磷酸鹽如唑來膦酸(zoledronicacid，ZA)被廣泛用于與代謝性疾病和與腫瘤相關(guān)的骨疾病的治療。然而最近雙磷酸鹽治療的病人出現(xiàn)一種嚴(yán)重的并發(fā)癥雙磷酸鹽相關(guān)性頜骨骨壞死(bisphosphonate-relatedosteonecrosisofthejaw，BRONJ)。BRONJ發(fā)生于口腔創(chuàng)傷后，并被證實(shí)主要是傷口愈合較差，軟組織斷裂，隨后死骨形成并暴露。目前對(duì)BRONJ沒有有效的臨床治療措施。本研究在體外培

2、養(yǎng)人牙齦成纖維細(xì)胞的基礎(chǔ)上，將其暴露于不同濃度(0-10μM)ZA，觀察隨濃度和時(shí)間增加出現(xiàn)的細(xì)胞學(xué)效應(yīng)，觀察唑來膦酸對(duì)牙齦成纖維細(xì)胞增殖凋亡的影響，探討唑來膦酸導(dǎo)致BRONJ的發(fā)生機(jī)制，為臨床上使用唑來膦酸輔助治療腫瘤提供參考資料和理論依據(jù)。
　　方法:
　　原代培養(yǎng)人牙齦成纖維細(xì)胞(humangingivalfibroblasts，HGF)，取第3-6代用于實(shí)驗(yàn)。利用不同濃度(0，0.5，1，5，10μM)ZA作用于HG

3、F，24小時(shí)后，倒置顯微鏡觀察細(xì)胞形態(tài)；羅丹明123染色，熒光顯微鏡觀察各組熒光強(qiáng)度；AnnexinV/PI雙染，流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞凋亡率，量化分析各組凋亡細(xì)胞數(shù)目。采用四甲基偶氮唑鹽比色法(methylthiazolylterazolium，MTT)和細(xì)胞增殖度法動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)長(zhǎng)期用藥對(duì)HGF增殖的影響。
　　結(jié)果:
　　1.采用組織塊原代培養(yǎng)法成功培養(yǎng)出人牙齦成纖維細(xì)胞。倒置顯微鏡下觀察可見，組織塊接種3-7天后即有細(xì)胞從其周

4、圍游出，細(xì)胞呈長(zhǎng)梭形，并圍繞組織塊呈放射狀排列。傳代后細(xì)胞生長(zhǎng)迅速，性狀穩(wěn)定。
　　2.ZA用藥24h后直接顯微鏡觀察發(fā)現(xiàn)，隨著藥物濃度的升高，細(xì)胞間間隙增寬，胞體皺縮，胞漿濃縮，且有細(xì)胞死亡脫落，凋亡細(xì)胞數(shù)目增加。羅丹明123染色，熒光顯微鏡下觀察，對(duì)照組熒光強(qiáng)度高于實(shí)驗(yàn)組，且隨著ZA濃度的增加，熒光強(qiáng)度呈遞減趨勢(shì)，說明隨著ZA濃度的升高，細(xì)胞凋亡數(shù)目增加。流式細(xì)胞儀的AnnexinV/PI雙染色法發(fā)現(xiàn)，本研究中從1μM開始，隨

5、著ZA濃度的升高，凋亡率顯著升高(P<0.05)，0.5μM組與對(duì)照組無明顯差異。
　　3.MTT法檢測(cè)結(jié)果顯示，1-10μM用藥24h對(duì)HGF的增殖作用均較對(duì)照組有明顯差異(P<0.05)，0.5μM組與對(duì)照組相比則無明顯差異(P>0.05)。細(xì)胞增殖度法觀察用藥在0.5-10μM和7天范圍內(nèi)表現(xiàn)為濃度-時(shí)間依賴效應(yīng)，隨著濃度升高，時(shí)間延長(zhǎng)，細(xì)胞增殖抑制更顯著，各不同濃度組之間存在統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.05)。
　　結(jié)論:<