FRNK對(duì)瘢痕疙瘩成纖維細(xì)胞凋亡的影響.pdf

1、目的：應(yīng)用脂質(zhì)體介導(dǎo)黏著斑激酶相關(guān)非激酶（FRNK）表達(dá)質(zhì)粒轉(zhuǎn)染瘢痕疙瘩成纖維細(xì)胞，探討FRNK抑制黏著斑激酶（FAK）磷酸化對(duì)瘢痕疙瘩成纖維細(xì)胞凋亡的影響，及其與FAK-ERK信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路、Ⅰ型膠原α1鏈（COL1A1）和Ⅲ型膠原α1鏈（COL3A1）之間的關(guān)系。
　　方法：⑴用Western blotting及RT-PCR檢測(cè)正常皮膚和瘢痕疙瘩中FRNK蛋白及mRNA水平；⑵應(yīng)用體外細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)，培養(yǎng)瘢痕疙瘩成纖維細(xì)胞，在脂質(zhì)

2、體介導(dǎo)下用FRNK表達(dá)質(zhì)粒瞬時(shí)轉(zhuǎn)染瘢痕疙瘩成纖維細(xì)胞，用膜聯(lián)蛋白/碘化丙啶雙標(biāo)記流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞的凋亡，用Western blotting檢測(cè)FAK、p-FAK、FRNK、細(xì)胞外信號(hào)調(diào)節(jié)激酶1（ERK1）、細(xì)胞外信號(hào)調(diào)節(jié)激酶2（ERK2）、p-ERK1、p-ERK2等相關(guān)指標(biāo)的蛋白質(zhì)表達(dá)。用RT-PCR方法檢測(cè)FAK、ERK、COL1A1、COL3A1等相關(guān)指標(biāo)的mRNA表達(dá)。
　　結(jié)果：①瘢痕疙瘩組織塊中的FRNK蛋白表達(dá)低于

3、正常皮膚（0.14±0.08 vs0.33±0.06），差異有顯著意義（P<0.05)。瘢痕疙瘩組織塊中FRNK mRNA表達(dá)低于正常皮膚(0.30±0.04 vs1.04±0.06),差異有顯著意義（P<0.05)。②FRNK表達(dá)質(zhì)粒轉(zhuǎn)染瘢痕疙瘩成纖維細(xì)胞于轉(zhuǎn)染后48h FRNK蛋白含量達(dá)最高，72h表達(dá)下降。③與空質(zhì)粒組相比，F(xiàn)RNK組FAK、ERK轉(zhuǎn)錄及翻譯水平均下降，F(xiàn)AK及ERK磷酸化水平也均下降（P<0.05）。④FRNK組

4、與空質(zhì)粒組相比，COL1A1、COL3A1 mRNA的表達(dá)水平均下降（0.23±0.10 vs0.85±0.02，0.60±0.02 vs1.06±0.10，P<0.01），而空質(zhì)粒組與對(duì)照組、脂質(zhì)體組間無明顯差別（P>0.05）。⑤FRNK組細(xì)胞凋亡率明顯高于對(duì)照組、脂質(zhì)體組、空質(zhì)粒組（36.63±4.89 vs3.87±0.07 vs3.62±0.54 vs3.72±0.08，P<0.05),而對(duì)照組、脂質(zhì)體組、空質(zhì)粒組之間無明顯差