茶多酚對鼠胎兒成纖維細胞凋亡的影響.pdf

1、細胞凋亡（Apoptosis）是生物體內(nèi)自發(fā)發(fā)生的細胞生理性的死亡，細胞正常凋亡對維持生物體正常生長發(fā)育和維持細胞內(nèi)環(huán)境穩(wěn)態(tài)的作用，細胞異常凋亡能夠引發(fā)疾病，如癌癥和腫瘤等。有報道指出在體外培養(yǎng)的細胞中添加抗氧化劑能夠抑制細胞凋亡，茶多酚（Tea polyphenols,TP）是一種天然抗氧化劑，具有多種生物學功能，抗氧化能力比其他抗氧化劑抗氧化能力強很多倍，對體外培養(yǎng)細胞主要用于癌細胞和腫瘤細胞的研究，且對抑制癌細胞和腫瘤細胞的生長作

2、用效果顯著，研究表明，TP具有抗癌和抗腫瘤的作用，但是在體細胞培養(yǎng)液中添加TP對體外培養(yǎng)鼠胎兒成纖維細胞凋亡效果的影響尚未見報道。
　　【目的】：本試驗主要通過體外培養(yǎng)MEF細胞，用不同濃度的TP培養(yǎng)液處理細胞，研究不同濃度的茶多酚培養(yǎng)液對鼠胎兒成纖維細胞存活率和細胞形態(tài)變化的影響，并應(yīng)用反轉(zhuǎn)錄方法檢測抗凋亡基因Bcl-2基因、促凋亡Bax基因和促凋亡基因Casase-3從分子水平上檢測基因表達量的變化，用來確定天然抗氧化劑茶多酚

3、對鼠胎兒成纖維細胞凋亡效果的影響。
　　【方法】：1.取妊娠12.5天昆明白母鼠，熱消化法分離原代細胞進行培養(yǎng)，差速貼壁法純化細胞，傳至第3代，繪制細胞生長曲線，檢測細胞活力。
　　2.用含有不同濃度的茶多酚培養(yǎng)液培養(yǎng)細胞，分別培養(yǎng)24h、36h、72h、96h，倒置顯微鏡觀察細胞形態(tài)，用MTT法進行細胞存活率的檢測，比較添加不同濃度茶多酚培養(yǎng)液對細胞存活率的影響。
　　3.用不同濃度的茶多酚培養(yǎng)液處理細胞，培養(yǎng)72h

4、，分別提取細胞總RNA，進行RT-PCR反應(yīng)，反轉(zhuǎn)錄合成目的基因Bax基因、Bcl-2基因和Caspase-3基因，瓊脂糖凝膠電泳對反應(yīng)產(chǎn)物進行檢測，使用軟件進行條帶灰度值的檢測，比較基因的相對表達量。
　　【結(jié)論】：通過細胞生長曲線確定了3代細胞適合試驗用，不同濃度的茶多酚培養(yǎng)液處理細胞后對鼠胎兒成纖維細胞生存率和形態(tài)的影響為：當茶多酚濃度低于100 mg/L時，MTT結(jié)果為72h時，對細胞促進作用最明顯，96h時，細胞生存率低

5、于72h時，可能是細胞正常生長的結(jié)果。對鼠胎兒成纖維細胞的生長具有促進作用，并且細胞形態(tài)沒有發(fā)生明顯的變化，通過實驗結(jié)果，當濃度為40 mg/mL時促進作用略微明顯，高于細胞對照組，但是沒有顯著差異，當細胞濃度高于100 mg/mL時對細胞生長具有抑制作用，從形態(tài)學觀察出細胞出現(xiàn)調(diào)亡現(xiàn)象。通過反轉(zhuǎn)錄結(jié)果表明在Bax基因、Bcl-2基因和Caspase-3基因的分子途徑上沒有什么影響,因此，TP各個濃度處理組中基因相對表達量沒有顯著性差異