間充質(zhì)干細(xì)胞抑制腫瘤細(xì)胞的作用及其信號(hào)途徑的研究.pdf

1、摘要摘要干細(xì)胞(stemcel)是當(dāng)今生命科學(xué)領(lǐng)域中的研究熱點(diǎn)，具有重要的理論意義和實(shí)際應(yīng)用價(jià)值。干細(xì)胞與腫瘤細(xì)胞之間具有十分密切的關(guān)系。研究發(fā)現(xiàn)，干細(xì)胞可向腫瘤發(fā)生部位定向遷移，并發(fā)揮抑制腫瘤細(xì)胞增殖的作用。我們實(shí)驗(yàn)室前期工作發(fā)現(xiàn)間充質(zhì)千細(xì)胞具有抑制腫瘤細(xì)胞的作用。本研究是在上述研究工作的基礎(chǔ)上，進(jìn)一步重點(diǎn)探討間充質(zhì)干細(xì)胞抑制腫瘤細(xì)胞的分子機(jī)制。主要研究內(nèi)容如下:第一部分:間充質(zhì)干細(xì)胞條件培養(yǎng)液對(duì)腫瘤細(xì)胞的抑制作用實(shí)驗(yàn)中應(yīng)用兩種不同來

2、源的間充質(zhì)干細(xì)胞，分別為胎兒真皮來源的23間充質(zhì)干細(xì)胞(通過穩(wěn)定轉(zhuǎn)染hTERT基因，發(fā)生了永生化)和胎兒骨髓來源的BMMS一03間充質(zhì)干細(xì)胞(未永生化)。取間充質(zhì)干細(xì)胞的條件培養(yǎng)液分別作用于人乳腺癌MCF.7幾MMCF一7細(xì)胞和肝癌H7402八lePGZ細(xì)胞，采用四甲基偶氮哇鹽(MTT)比色法、BrdU摻入分析和流式細(xì)胞儀等技術(shù)檢測(cè)了腫瘤細(xì)胞的增殖情況，結(jié)果顯示上述細(xì)胞的增殖受到明顯抑制采用細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)和瓊脂糖滴實(shí)驗(yàn)檢測(cè)腫瘤細(xì)胞遷移能力

3、的變化，發(fā)現(xiàn)間充質(zhì)干細(xì)胞條件培養(yǎng)液可明顯抑制腫瘤細(xì)胞的遷移采用克隆形成實(shí)驗(yàn)檢測(cè)腫瘤細(xì)胞克隆形成能力的變化，發(fā)現(xiàn)間充質(zhì)干細(xì)胞條件培養(yǎng)液可明顯抑制腫瘤細(xì)胞的克隆形成。上述結(jié)果提示，間充質(zhì)干細(xì)胞釋放可溶性生物活性因子，抑制了腫瘤細(xì)胞的增殖、遷移和克隆形成等惡性表型。第二部分:間充質(zhì)干細(xì)胞抑制腫瘤細(xì)胞的分子機(jī)制的研究為了闡明間充質(zhì)干細(xì)胞抑制腫瘤細(xì)胞作用的分子機(jī)制，我們對(duì)腫瘤細(xì)胞在間充質(zhì)干細(xì)胞條件培養(yǎng)液作用后wn燈p一c川enln信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑進(jìn)行

4、了觀察。免疫印跡技術(shù)檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，在應(yīng)用間充質(zhì)干細(xì)胞條件培養(yǎng)液作用后，MCF一7、LM一MCF一7、H7402和HePGZ細(xì)胞中p一catenin和其下游靶蛋白如c一Myc、survivin、PCNA和Bcl一的表達(dá)水平發(fā)生明顯下調(diào)采用免疫熒光染色技術(shù)檢測(cè)了p.catenin的表達(dá)及定位情況，結(jié)果顯示，經(jīng)過間充質(zhì)千細(xì)胞條件培養(yǎng)液作用后，MCF一7和H7402細(xì)胞胞漿和胞核內(nèi)p一catenin的含量明顯減少。上述結(jié)果提示，間充質(zhì)干細(xì)胞釋放可溶

5、性生物活性因子，通過抑制腫瘤細(xì)胞中摘要明顯抑制，并且呈劑量依賴關(guān)系。此外，應(yīng)用westemblot方法檢測(cè)了NF一已及p一1已。在蛋白水平的變化，結(jié)果顯示，乳腺癌細(xì)胞和肝癌細(xì)胞中的NF.KB及PI妞a均明顯下調(diào)。這些結(jié)果表明腫瘤細(xì)胞中NF一‘的表達(dá)和活性調(diào)節(jié)受到間充質(zhì)干細(xì)胞條件培養(yǎng)液的抑制，但有關(guān)間充質(zhì)干細(xì)胞釋放的上游生物活性因子尚不清楚。綜上所述，本研究探討了間充質(zhì)干細(xì)胞抑制腫瘤細(xì)胞增殖的作用及分子機(jī)制，首次發(fā)現(xiàn)間充質(zhì)干細(xì)胞可高水平表