間充質干細胞抑制腫瘤細胞的作用及其信號途徑的研究.pdf

1、摘要摘要干細胞(stemcel)是當今生命科學領域中的研究熱點，具有重要的理論意義和實際應用價值。干細胞與腫瘤細胞之間具有十分密切的關系。研究發(fā)現，干細胞可向腫瘤發(fā)生部位定向遷移，并發(fā)揮抑制腫瘤細胞增殖的作用。我們實驗室前期工作發(fā)現間充質千細胞具有抑制腫瘤細胞的作用。本研究是在上述研究工作的基礎上，進一步重點探討間充質干細胞抑制腫瘤細胞的分子機制。主要研究內容如下:第一部分:間充質干細胞條件培養(yǎng)液對腫瘤細胞的抑制作用實驗中應用兩種不同來

2、源的間充質干細胞，分別為胎兒真皮來源的23間充質干細胞(通過穩(wěn)定轉染hTERT基因，發(fā)生了永生化)和胎兒骨髓來源的BMMS一03間充質干細胞(未永生化)。取間充質干細胞的條件培養(yǎng)液分別作用于人乳腺癌MCF.7幾MMCF一7細胞和肝癌H7402八lePGZ細胞，采用四甲基偶氮哇鹽(MTT)比色法、BrdU摻入分析和流式細胞儀等技術檢測了腫瘤細胞的增殖情況，結果顯示上述細胞的增殖受到明顯抑制采用細胞劃痕實驗和瓊脂糖滴實驗檢測腫瘤細胞遷移能力

3、的變化，發(fā)現間充質干細胞條件培養(yǎng)液可明顯抑制腫瘤細胞的遷移采用克隆形成實驗檢測腫瘤細胞克隆形成能力的變化，發(fā)現間充質干細胞條件培養(yǎng)液可明顯抑制腫瘤細胞的克隆形成。上述結果提示，間充質干細胞釋放可溶性生物活性因子，抑制了腫瘤細胞的增殖、遷移和克隆形成等惡性表型。第二部分:間充質干細胞抑制腫瘤細胞的分子機制的研究為了闡明間充質干細胞抑制腫瘤細胞作用的分子機制，我們對腫瘤細胞在間充質干細胞條件培養(yǎng)液作用后wn燈p一c川enln信號轉導途徑進行

4、了觀察。免疫印跡技術檢測發(fā)現，在應用間充質干細胞條件培養(yǎng)液作用后，MCF一7、LM一MCF一7、H7402和HePGZ細胞中p一catenin和其下游靶蛋白如c一Myc、survivin、PCNA和Bcl一的表達水平發(fā)生明顯下調采用免疫熒光染色技術檢測了p.catenin的表達及定位情況，結果顯示，經過間充質千細胞條件培養(yǎng)液作用后，MCF一7和H7402細胞胞漿和胞核內p一catenin的含量明顯減少。上述結果提示，間充質干細胞釋放可溶

5、性生物活性因子，通過抑制腫瘤細胞中摘要明顯抑制，并且呈劑量依賴關系。此外，應用westemblot方法檢測了NF一已及p一1已。在蛋白水平的變化，結果顯示，乳腺癌細胞和肝癌細胞中的NF.KB及PI妞a均明顯下調。這些結果表明腫瘤細胞中NF一‘的表達和活性調節(jié)受到間充質干細胞條件培養(yǎng)液的抑制，但有關間充質干細胞釋放的上游生物活性因子尚不清楚。綜上所述，本研究探討了間充質干細胞抑制腫瘤細胞增殖的作用及分子機制，首次發(fā)現間充質干細胞可高水平表