人羊膜間充質(zhì)干細(xì)胞與骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞對(duì)外周血淋巴細(xì)胞免疫調(diào)節(jié)作用的比較.pdf

1、目的：
　　本實(shí)驗(yàn)通過(guò)在體外分別建立人羊膜間充質(zhì)干細(xì)胞(human amniotic mesenchymal stem cell，hAMSC)、骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(bone marrow mesenchymal stem cell，hBMSC)與PHA刺激的外周血單個(gè)核細(xì)胞(PMBC)共培養(yǎng)體系的方法，比較hAMSC與hBMSC對(duì)異體外周血淋巴細(xì)胞的免疫調(diào)節(jié)功能，希望為未來(lái)hAMSC治療移植物抗宿主?。╣raft-versus-ho

2、st diease，GVHD）的臨床應(yīng)用以及解決hBMSC來(lái)源有限的問(wèn)題進(jìn)一步提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)及新思路。
　　方法：
　　(1)選用酶消化法從新鮮胎盤羊膜組織中分離得到人羊膜間充質(zhì)干細(xì)胞并利用傳代純化方法篩選出在體外能穩(wěn)定傳代培養(yǎng)的hAMSC;采用Ficoll-Hypaque密度梯度離心法從骨髓中分離得到間充質(zhì)干細(xì)胞，在體外傳代培養(yǎng)得到純化的hBMSC。
　　(2)采取Ficoll-Hypaque密度梯度離心法分離獲取人外

3、周血單個(gè)核細(xì)胞(peripheral blood mononuclear cell,PBMC)。
　　(3)取經(jīng)絲裂霉素(mitomvcin C，MC)處理的第4代hAMSC和hBMSC分別與PHA刺激的PBMC共培養(yǎng)72小時(shí)，將兩種來(lái)源的MSC對(duì)外周血淋巴細(xì)胞免疫調(diào)節(jié)功能的比較分為實(shí)驗(yàn)組(hAMSC+PBMC+PHA組和hBMSC+PBMC+PHA組)，陽(yáng)性對(duì)照組（PBMC+PHA組），陰性對(duì)照組（單獨(dú)培養(yǎng)的PBMC組、經(jīng)絲裂霉

4、素處理后單獨(dú)培養(yǎng)的hAMSC和hBMSC組）。
　　(4)采取流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)各實(shí)驗(yàn)組和陽(yáng)性對(duì)照組中Treg、Th1、Th2、Tc1、Tc2細(xì)胞比例。
　　(5)采取酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)檢測(cè)實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組中上清液中白介素-2(IL-2)、白介素-10(IL-10)的含量。
　　結(jié)果：
　　(1)與PBMC+PHA組比較，hAMSC+PBMC+PHA組、hBMSC+PBMC+PHA組中Treg、Th2、Te

5、2的比例均明顯上升(P＜0.05)，hAMSC+PBMC+PHA組、hBMSC+PBMC+PHA組中Th1、Tc1的比例明顯下降(P＜0.05)，hAMSC+PBMC+PHA、hBMSC+PBMC+PHA共培養(yǎng)組T細(xì)胞亞群的變化差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。
　　(2)ELISA檢測(cè)結(jié)果顯示，與PBMC+PHA組比較，hAMSC+PBMC+PHA組、hBMSC+PBMC+PHA組上清液中IL-2的含量明顯下降(P＜0.05)，

6、hAMSC+PBMC+PHA組、hBMSC+PBMC+PHA組上清液中IL-10的含量明顯上升(P＜0.05)，hAMSC+PBMC+PHA、hBMSC+PBMC+PHA共培養(yǎng)組上清液中IL-2、IL-10含量的差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。
　　結(jié)論：
　　hAMSC、hBMSC在體外均能使經(jīng)PHA刺激的異體淋巴細(xì)胞中Treg、Th2、Tc2細(xì)胞亞群的比例上升并促進(jìn)其IL-10的分泌，均能下調(diào)Th1、Tc1細(xì)胞亞群的比