實驗性肺纖維化大鼠肺泡泡沫細胞比例和功能變化及羅格列酮的影響.pdf

1、肺纖維化的發(fā)病率和病死率逐年增高，發(fā)病機制尚未完全清楚。肺泡巨噬細胞在肺纖維化發(fā)病機制中起重要作用。以往研究已證實在肺纖維化形成過程中肺泡巨噬細胞源性泡沫細胞增多，但其在肺纖維化發(fā)病機制中的作用及機制尚不清楚。轉(zhuǎn)化生長因子β 1(transforming growth factor β 1，TGF-β 1)是肺纖維化中研究最深、最重要的細胞因子，并被認為是迄今發(fā)現(xiàn)的最強的細胞外基質(zhì)沉積促進劑。在多種因素導致的肺纖維化中(包括博萊霉素、環(huán)

2、磷酰胺和射線)均發(fā)現(xiàn)TGF-β 1，含量增高。結(jié)締組織生長因子(connectivetissue growth factor，CTGF)是一種富含半胱氨酸的分泌性多肽，是介導TGF-β1致纖維化作用的重要的下游介質(zhì)，與皮膚、肝、腎等組織器官纖維化有著重要聯(lián)系，但在肺纖維化中的作用研究不多。一氧化氮(NO)與肺纖維化的關(guān)系開始受到重視。誘導型一氧化氮合酶(inducible nitric oxidesynthase，iNOS)抑制劑氨基胍

3、能顯著降低肺勻漿中iNOS活性，減少NO釋放，顯著延緩、減輕肺泡炎。在肺內(nèi)NO增多時，肺內(nèi)iNOS免疫陽性細胞數(shù)量增多，肺泡巨噬細胞釋放NO的能力增強。羅格列酮(rosiglitazone，RSG)是過氧化物酶體增生物激活受體γ(peroxisome proliferator-activatedreceptor γ，PPAR γ)的特異性配體。PPAR γ可以調(diào)節(jié)控制脂質(zhì)和糖代謝基因的核受體，其對泡沫細胞形成中的作用尚有爭議。

4、本研究用博萊霉素(Bleomycin，BLM)誘導大鼠肺纖維化，并以RSG進行干預，觀察肺泡泡沫細胞比例的變化，以及肺泡泡沫細胞較肺泡巨噬細胞TGF-β 1、CTGF及iNOS表達的改變，探討泡沫細胞在肺纖維化發(fā)病機制中的作用，以及RSG的影響。 1 肺纖維化大鼠肺泡泡沫細胞比例的變化及RSG的影響 目的：治療劑量的RSG對肺纖維化大鼠肺泡泡沫細胞數(shù)量的影響。 方法 將健康雄性SD大鼠60只分14天、28

5、天兩大組。 14天組4組，每組6只。①sham14組：氣管滴注生理鹽水(normal sodium，NS)0．1ml，次日NS(1ml/d)灌胃14天。②R14組：氣管滴注NS 0．1ml，次日RSG(3mg/kg/d)灌胃14天。③B+NS14組：氣管滴注BLMA<,5> 5mg/kg，次日NS(1ml/d)灌胃14天。④B+R14組：氣管滴注BLMA<,5> 5mg/kg，次日RSG(3mg/kg/d)灌胃14天。各組于14

6、天后取材。28天組分為6組，每組6只①Sham28組：氣管滴注NS0．1ml，次日NS(1ml/d)灌胃28天。(g)R28組：氣管滴注NS 0．1ml，次日RSG(3mg/kg/d)灌胃28天。③B+NS28組：氣管滴注BLMA<,5> 5mg/kg，次日NS(1ml/d)灌胃28天。④B+R28組：滴注BLMA<,5> 5mg/kg，次日RSG(3mg/kg/d)灌胃28天。⑤B+R14N14組：滴注BLMA<,5> 5mg/kg，

7、次日RSG(3mg/kg/d)灌胃14天，之后NS(1ml/d)灌胃14天。⑥B+N14R14組：滴注BLMAs 5mg/kg，次日14天NS(1ml/d)灌胃14天，之后RSG(3mg/kg/d)灌胃14天。各組于給藥后28d取材。行支氣管肺泡灌洗術(shù)觀察支氣管肺泡灌洗液(broncho-alveolar lavage fluid，BALF)細胞總數(shù)及油紅O染色法估算BALF中泡沫細胞的比例。 結(jié)果：BALF中細胞總數(shù)各RSG組

8、與其對應Sham組相比細胞數(shù)量無明顯差異(P>0.05)。一次性氣管內(nèi)滴注BLM后，BALF中細胞總數(shù)增加，且細胞數(shù)量在肺纖維化炎癥期(滴注BLM 14天后)高于肺纖維化形成期(滴注BLM 28天后)(P<0.01)；給予RSG治療后，BALF中細胞總數(shù)除B+NS14R14組與模型組無明顯差異外，其余各組均明顯降低(P<0.01)。 油紅O陽性細胞(即泡沫細胞)百分率RSG組、模型組、治療組與其sham組相比，油紅O陽性細胞百分

9、率均顯著增高(P<0.01)。各治療組與其對應的模型組相比，油紅O陽性細胞百分率均顯著增高(P<0.01)。B+NS14R14組與B+R14NS14組相比，油紅O陽性細胞百分率率顯著降低(P<0.01)。B+N$28組與B+NS14組相比，油紅O陽性細胞百分率率顯著降低(P<0.01)。 小結(jié)：在BLM誘導大鼠肺纖維化形成過程中，BALF細胞總數(shù)增多，泡沫細胞比例增高。RSG部分抑制BLM引起的BALF細胞總數(shù)增多，且RSG增加

10、BALF中泡沫細胞的比例，其作用在前14天更顯著。 2 泡沫細胞和巨噬細胞TGF-β 1、CTGF及iNOS表達差異及RSG的影響 目的：通過TGF-β 1、CTGF及iNOS在肺泡沫細胞中表達的變化的觀察闡述RSG及泡沫細胞在肺纖維化中的作用。 方法：實驗分組同第一部分。 以油紅O及免疫組織化學雙重染色法區(qū)別TGF-β 1、CTGF及iNOS在泡沫細胞與巨噬細胞表達差異。 結(jié)果：TGF-β 1免

11、疫組織化學結(jié)果肺纖維化的前14天表達TGF-β1細胞的數(shù)量和比例多于后14天。BALF中表達TGF-β1的泡沫細胞比例多于巨噬細胞。RSG促使巨噬細胞形成泡沫細胞使表達TGF-β1的細胞比例增加，其作用在前14天更顯著，但由于RSG部分抑制BLM引起的BALF細胞總數(shù)增多，使表達TGF-β1的細胞數(shù)量減少或無明顯變化。 CTGF免疫組織化學結(jié)果肺纖維化的前14天表達CTGF細胞的比例低于后14天，而表達CTGF細胞的數(shù)量高于后1

12、4天。BALF中表達CTGF的泡沫細胞比例小于巨噬細胞。RSG促使巨噬細胞形成泡沫細胞且部分抑制BLM引起的BALF細胞總數(shù)增多使表達CTGF的細胞的數(shù)量和比例減少從而使表達CTGF細胞總數(shù)和比例下降且前14天給藥與后14天給藥相比更為明顯。 iNOS免疫組織化學結(jié)果肺纖維化的前14天表達iNOS細胞的比例低于后14天，而表達iNOS細胞的數(shù)量高于后14天。BALF中表達iNOS的泡沫細胞比例小于巨噬細胞。RSG促使巨噬細胞形成

13、泡沫細胞部分抑制BLM引起的BALF細胞總數(shù)增多使表達iNOS的細胞的數(shù)量和比例減少從而使表達iNOS細胞總數(shù)和比例且前14天給藥與后14天給藥相比更為明顯。 小結(jié)：氣管內(nèi)一次性滴注BLM可引起B(yǎng)ALF中細胞TGF-β1、CTGF以及iNOS表達上調(diào)。泡沫細胞表達iNOS、CTGF數(shù)量及比例低于巨噬細胞。因而巨噬細胞源性泡沫細胞的增多可能減輕肺纖維化程度。RSG通過提高BALF中泡沫細胞的數(shù)量和比例而部分抑制BLM引起的CTGF