職業(yè)性接觸抗癌藥物甲氨喋呤、長(zhǎng)春新堿工人的遺傳損傷研究.pdf

1、目的:治療癌癥的化療的廣泛運(yùn)用涉及到可能對(duì)配制、管理和生產(chǎn)細(xì)胞毒性藥物的員工造成危害?？鼓[瘤藥物是通過殺死增生細(xì)胞和破壞細(xì)胞分裂來阻止腫瘤生長(zhǎng)的化學(xué)物，然而，許多抗腫瘤藥物在動(dòng)物實(shí)驗(yàn)和體外實(shí)驗(yàn)證明具有致癌性、致突變性和致畸性?？鼓[瘤藥物包括細(xì)胞抑制劑、激素類、抗生素和其它支持療法的藥物。細(xì)胞抑制劑又可分為烷化劑、抗代謝物和有絲分裂抑制劑、自由基產(chǎn)生劑和拓?fù)洚悩?gòu)Ⅱ型酶抑制劑。因不同種類的抗腫瘤藥物其抑制腫瘤細(xì)胞惡性生長(zhǎng)的機(jī)理也不同，所以聯(lián)

2、合化療被廣泛運(yùn)用?？鼓[瘤藥物職業(yè)暴露的流行病學(xué)研究多數(shù)是在對(duì)病人的藥物配制和管理的人群中進(jìn)行的，這些人處于混合抗腫瘤藥物暴露環(huán)境。在這些研究中，檢測(cè)細(xì)胞遺傳損傷的方法有姐妹染色單體交換試驗(yàn)(SCE)，染色體畸變?cè)囼?yàn)(CA)，微核試驗(yàn)(MN)，彗星試驗(yàn)和基因突變?cè)囼?yàn)。 甲氨喋呤(MTX)是一種抗代謝抗腫瘤藥物，雖然國(guó)際癌癥研究中心(IARC)認(rèn)為MTX對(duì)人致癌的證據(jù)尚不足，但有研究顯示MTX能作用于染色體水平，誘發(fā)姐妹染色單體交換

3、、微核和染色體畸變。 長(zhǎng)春新堿(VCR)是一種抗有絲分裂的抗腫瘤藥物，并被IARC列為10種對(duì)人致癌的抗癌藥物中的一種(IARC，1987，1990)。長(zhǎng)春新堿系紡錘體毒物，能影響有絲分裂和減數(shù)分裂，誘發(fā)染色體多倍體、染色體畸變和微核，而且低劑量VCR還具有致畸作用。為了研究單純接觸MTX、VCR的工人是否存在遺傳損傷效應(yīng)，本實(shí)驗(yàn)用三個(gè)遺傳終點(diǎn)即染色體損傷(微核試驗(yàn))、基因突變(hprt基因突變?cè)囼?yàn)和TCR基因突變?cè)囼?yàn))和DNA

4、損傷(彗星試驗(yàn))進(jìn)行研究。 材料與方法: 1.樣本肝素化的外周血采自生產(chǎn)甲氨喋呤和生產(chǎn)長(zhǎng)春新堿工人及年齡、性別、吸煙配對(duì)的對(duì)照組人群。 生產(chǎn)甲氨喋呤工人21名(男11名、女10名)平均年齡35±2.27歲(19～50歲)。男女工人平均年齡分別是32和38歲，之間沒有顯著性差異(P=0.165)。21名對(duì)照組工人按年齡、性別、吸煙與工人組配對(duì)(無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異)，平均年齡37±2.19歲(21～55歲)。工廠車間約

5、200m2，無良好通風(fēng)設(shè)備，20個(gè)工人使用防護(hù)措施(手套和口罩)。工種有清洗、生產(chǎn)、包裝、檢測(cè)和配制。每個(gè)工人的暴露條件相似。采血后即送實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行檢測(cè)。 生產(chǎn)長(zhǎng)春新堿工人15名(男6名、女9名)平均年齡43±1.13歲(36～52歲)。男女工人平均年齡分別是44和43歲，之間沒有顯著性差異(P=0.733)。15名對(duì)照組工人按年齡、性別、吸煙與工人組配對(duì)(無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異)，平均年齡43±1.41歲(36～55歲)。工廠車間約300

6、m2，亦無良好的通風(fēng)設(shè)備，15個(gè)工人使用防護(hù)措施(手套和口罩)。工種有精致和合成。每個(gè)工人的暴露條件相似。采血后即送實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行檢測(cè)。 2.彗星試驗(yàn)：分離淋巴細(xì)胞，調(diào)整細(xì)胞密度并用臺(tái)盼藍(lán)染色計(jì)數(shù)細(xì)胞存活率，經(jīng)制片、細(xì)胞裂解、電泳、中和、染色等步驟后在熒光顯微鏡顯微鏡(OLYMPUS-BX51)下觀察。測(cè)量彗星圖像指標(biāo)是彗星尾長(zhǎng)和尾相。TCR基因突變?cè)囼?yàn)：分離淋巴細(xì)胞，用臺(tái)盼藍(lán)試驗(yàn)檢測(cè)細(xì)胞存活率并計(jì)數(shù)細(xì)胞數(shù)目。加入抗人CD4-fl

7、uoresceinisothiocyanate(FITC)和CD3-phycoerythrin(PE)單克隆抗體(BDBiosciences)，避光冰育30分鐘。TCR突變CD3-CD4+T細(xì)胞通過安裝SystemⅡ軟件的流式細(xì)胞儀CoulterEPICSXL檢測(cè)，計(jì)算TCR基因突變率。 3.微核試驗(yàn)：將全血于1640培養(yǎng)基中37℃培養(yǎng)44h，加入細(xì)胞松弛素B，繼續(xù)培養(yǎng)28h后收獲細(xì)胞，經(jīng)離心、低滲、固定、制片、自然干燥后Gie

8、ma染色。高倍鏡下計(jì)數(shù)1000個(gè)雙核細(xì)胞，計(jì)算微核細(xì)胞率和微核率。計(jì)數(shù)400個(gè)細(xì)胞，計(jì)算NDI指數(shù)。 hprt基因突變?cè)囼?yàn)：基本方法與微核實(shí)驗(yàn)同。其中一份培養(yǎng)基加入0.2mM的6-巰基鳥嘌呤(Sigma)。37℃恒溫箱中培養(yǎng)72h。制片后在400倍光學(xué)顯微鏡下觀測(cè)在同一胞漿內(nèi)具有完整核膜的相壓、相切或分離的雙核或多核的淋巴細(xì)胞數(shù)，計(jì)算hprt基因突變率。 結(jié)論:結(jié)果表明職業(yè)性接觸甲氨喋呤和長(zhǎng)春新堿工人可檢測(cè)出遺傳損傷效