炭疽減毒活疫苗A16R粘膜免疫和細(xì)胞因子作用的研究.pdf

1、目的：本文通過對炭疽減毒活疫苗A16R滴鼻途徑與皮下免疫途徑的免疫效果比較，為新的免疫途徑提供實(shí)驗(yàn)及理論依據(jù)，為臨床提供更有效、簡便、安全的免疫方法；應(yīng)用RT-PCR方法檢測免疫后不同時(shí)間細(xì)胞因子表達(dá)的變化，試圖對細(xì)胞因子在疫苗免疫后的作用作一闡述。 方法：本試驗(yàn)的小鼠分為滴鼻組、皮下組和對照組，以相同劑量(5×107CFU，相當(dāng)于人用劑量的1/20)免疫4次，每周免疫1次，4次免疫后7天及末次免疫后30、60、90天收集血清及

2、鼻通道、肺灌洗液，小腸和陰道沖洗液。使用ELISA方法檢測炭疽特異性抗體IgA、IgG及其亞型(IgG1、IgG2a和IgG2b)，分離鼻相關(guān)淋巴組織(NALT)、鼻通道(NP)、脾(SP)、小腸PP結(jié)淋巴細(xì)胞，采用流式細(xì)胞術(shù)檢測淋巴細(xì)胞表型的變化，用強(qiáng)毒株進(jìn)行腹腔攻擊檢測疫苗保護(hù)力；用相同劑量腹部皮下免疫小鼠，在第一次免疫后4、16、24小時(shí)，第二、三次免疫后24小時(shí)(每次免疫間隔1周)及攻毒后12天，分離小鼠肝臟總RNA并反轉(zhuǎn)錄成c

3、DNA，通過PCR法擴(kuò)增IL-6、MCP-1、CD86、CD64、IL-1β、TNF-α、IL-4和IL-2等細(xì)胞因子，通過瓊脂糖凝膠電泳觀察結(jié)果。 結(jié)果：5×107CFU炭疽減毒活疫苗A16R免疫后，皮下免疫途徑可誘導(dǎo)較高的血清特異性IgG抗體，但未能誘導(dǎo)IgA抗體，滴鼻免疫既可誘導(dǎo)血清特異性IgG抗體，又可誘導(dǎo)IgA抗體及多個(gè)粘膜部位sIgA抗體。兩組IgG1/IgG2a比值均高于對照組。攻毒后皮下組全部存活，滴鼻組保護(hù)率達(dá)

4、80％。流式結(jié)果表明，CD4+/CD8+T淋巴細(xì)胞比值：NA中對照組＜滴鼻組＜皮下組；PP中皮下組＜滴鼻組＜對照組；在SP皮下組＜對照組＜滴鼻組。CD3+/CD45+T淋巴細(xì)胞比值：NA、PP中皮下組＜滴鼻組＜對照組；NP中對照組＜滴鼻組＜皮下組；SP中對照組＜皮下組＜滴鼻組。末次免疫后30天、60天、90天同末次免疫后7天相比，特異性抗體水平的大幅下降主要發(fā)生在末次免疫后7～30天，之后抗體水平下降趨于平緩。各粘膜部位抗體下降速率有一

5、定規(guī)律性：鼻咽沖洗液＞陰道沖洗液＞肺沖洗液。細(xì)胞因子IL-1β、CD64和CD86在各免疫時(shí)間點(diǎn)均可檢測到，表達(dá)量穩(wěn)定；MCP-1在免疫后早期未檢測到，但在第一、二、三次免疫后24小時(shí)連續(xù)得到穩(wěn)定表達(dá)。第二次免疫后24小時(shí)所有分子均可檢測到，且各分子mRNA表達(dá)豐度較其他時(shí)間均高；第三次免疫后24小時(shí)除了IL-4和IL-6未檢測到外，其余分子也都可檢測到。在攻毒后存活的小鼠體內(nèi)檢測到IL-1β、CD64、CD86和少量的IL-2。