EV71-CA16聯(lián)合滅活疫苗免疫保護(hù)效果研究.pdf

1、目的:利用腸道病毒71型-柯薩奇病毒A組16型(EV71-CA16)聯(lián)合滅活疫苗，對(duì)動(dòng)物體內(nèi)和體外的保護(hù)效果進(jìn)行研究。嘗試用致敏的T淋巴細(xì)胞通過(guò)腹腔過(guò)繼回輸?shù)姆椒ń⑦^(guò)繼免疫乳鼠模型，對(duì)細(xì)胞免疫反應(yīng)與保護(hù)作用之間的關(guān)系進(jìn)行探索性研究。
　　方法:用Vero細(xì)胞培養(yǎng)疫苗候選株EV71-KM和CA16-KM，病毒收獲后經(jīng)β-丙內(nèi)酯滅活，Al(OH)3佐劑吸附，制成實(shí)驗(yàn)性疫苗。實(shí)驗(yàn)性疫苗分別于第0和14天經(jīng)肌肉注射免疫8周齡ICR雌鼠，

2、100μl/只，聯(lián)合免疫組免疫劑量分為:EV71256EU+CA1632EU組、EV71256EU+CA16320EU組與EV71256EU+CA16960EU組，對(duì)照組注射等體積PBS，第一次免疫后1h與雄鼠合籠，隨其交配，分娩后24h內(nèi)采集母鼠和乳鼠的血液用于血清中和抗體滴度的檢測(cè);同時(shí)用100LD50強(qiáng)毒株(EV71-CC，CA16-CC)經(jīng)顱內(nèi)注射進(jìn)行攻毒，連續(xù)21天觀察其臨床癥狀與死亡情況，評(píng)價(jià)聯(lián)合疫苗對(duì)乳鼠的保護(hù)作用。用CA

3、16-KM滅活疫苗（抗原含量為32EU/100μl）經(jīng)腹腔注射免疫1日齡SPF級(jí)ICR乳鼠2次，間隔2周，40μl/只，對(duì)照組注射等體積PBS，末次免疫后第7天，以安樂(lè)法處死小鼠，無(wú)菌條件下取出脾臟，分選脾臟單個(gè)核細(xì)胞、T細(xì)胞、B細(xì)胞、記憶性T細(xì)胞、效應(yīng)性T細(xì)胞，將分選的細(xì)胞經(jīng)腹腔注射回輸1日齡乳鼠，回輸2h后用強(qiáng)毒株(CA16-CC)經(jīng)顱內(nèi)注射攻擊，連續(xù)21天觀察其臨床癥狀與死亡情況，評(píng)價(jià)細(xì)胞免疫反應(yīng)與保護(hù)作用之間的關(guān)系。
　　

4、結(jié)果:各實(shí)驗(yàn)組未檢測(cè)到血清特異性中和抗體;EV71-KM滅活疫苗和CA16-KM滅活疫苗之間沒(méi)有交叉保護(hù)作用。兩種疫苗單獨(dú)免疫雌鼠能夠完全保護(hù)其新生乳鼠抵抗相應(yīng)病毒致死劑量的攻擊;聯(lián)合免疫時(shí)，EV71256EU+CA1632EU劑量組，對(duì)EV71的保護(hù)率為100％，對(duì)CA16的保護(hù)率及EV71和CA16同時(shí)攻毒的保護(hù)率為0％; CA16免疫劑量提高到320EU時(shí)，對(duì)EV71和CA16同時(shí)攻毒總的保護(hù)率為30％;對(duì)EV71的保護(hù)率為100

5、％，對(duì)CA16保護(hù)率為67％。CA16免疫劑量提高到960EU時(shí)，對(duì)兩個(gè)病毒同時(shí)攻擊的保護(hù)率為70％，對(duì)EV71和CA16分別攻擊的保護(hù)率均達(dá)到100％，對(duì)照組的保護(hù)率為0％。CA16滅活疫苗免疫組小鼠脾臟單個(gè)核細(xì)胞以2×107/只回輸ICR乳鼠，對(duì)CA16攻擊產(chǎn)生100％的保護(hù);免疫組T細(xì)胞以1×107/只回輸ICR乳鼠，對(duì)CA16攻擊產(chǎn)生60％的保護(hù);免疫組B細(xì)胞以1×107/只回輸ICR乳鼠，對(duì)CA16的攻擊產(chǎn)生56％的保護(hù);免疫

6、組CD4+T和CD8+T細(xì)胞以5.0×106/只回輸裸乳鼠、免疫組記憶性T細(xì)胞、效應(yīng)性T細(xì)胞以2.0×105/只回輸裸乳鼠后對(duì)病毒攻擊均無(wú)保護(hù)，對(duì)照組對(duì)病毒攻擊均無(wú)保護(hù)。
　　結(jié)論:EV71-CA16聯(lián)合免疫動(dòng)物可誘導(dǎo)產(chǎn)生針對(duì)兩種病毒的免疫反應(yīng)。EV71256EU在與三個(gè)CA16不同配比劑量組中均可產(chǎn)生完全保護(hù);CA16低劑量組沒(méi)有有保護(hù)作用，提高劑量后，保護(hù)率也提高。致敏的脾臟單個(gè)核細(xì)胞過(guò)繼回輸至新生乳鼠體內(nèi)可完全保護(hù)其抵抗CA