禽舍葡萄球菌氣溶膠發(fā)生及傳播的研究.pdf

1、本研究在一年之內(nèi)對(duì)不同的雞場(chǎng)舍內(nèi)環(huán)境中和舍外環(huán)境細(xì)菌氣溶膠的含量進(jìn)行了檢測(cè)，同時(shí)對(duì)舍內(nèi)和舍外氣載細(xì)菌之間的相關(guān)性進(jìn)行了初步分析；其次，對(duì)環(huán)境中氣載葡萄球菌菌群組成進(jìn)行鑒定，并且對(duì)細(xì)菌氣溶膠顆粒在Andersen-6采集器A-F6個(gè)層級(jí)上的分布進(jìn)行分析，從而進(jìn)一步分析畜禽舍內(nèi)氣載細(xì)菌對(duì)機(jī)體的呼吸系統(tǒng)健康的危害情況；然后以金黃色葡萄球菌為指示菌通過(guò)對(duì)舍外及舍內(nèi)空氣、糞便中細(xì)菌含量的測(cè)定，用REP-PCR方法對(duì)畜禽舍氣載細(xì)菌的傳播進(jìn)行分析；最

2、后，對(duì)不同季節(jié)畜禽舍內(nèi)環(huán)境中氣載細(xì)菌含量的變化進(jìn)行了分析。 本研究可分為四個(gè)部分： 第一部分：雞場(chǎng)環(huán)境葡萄球菌氣溶膠含量的測(cè)定本實(shí)驗(yàn)采用Andersen-6級(jí)空氣微生物樣品收集器和LWC-1離心式微生物采樣器，以5％公綿羊血-瓊脂培養(yǎng)基為采樣介質(zhì)對(duì)雞舍內(nèi)及舍外上風(fēng)向10m、50m與下風(fēng)向10m、50m、100m、200m、400m、600m不同距離檢測(cè)氣載需氧活菌濃度；采用革蘭氏染色法和API細(xì)菌快速鑒定系統(tǒng)鑒定細(xì)菌并確

3、定葡萄球菌的含量。結(jié)果顯示雞舍內(nèi)空氣中氣載需氧活菌含量介于5.2x101～2.47x104CFU/m3空氣之間，氣載需葡萄球菌含量介于5.8x101～1.76x103CFU/m3之間，其在金黃色葡萄球菌含量介于6×101～4.34×102CFU/m3之間。 對(duì)不同雞場(chǎng)舍內(nèi)氣載細(xì)菌含量與舍外不同距離細(xì)菌含量之間的數(shù)量關(guān)系進(jìn)行了統(tǒng)計(jì)分析，結(jié)果表明舍內(nèi)氣載葡萄球菌濃度遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于舍外上風(fēng)向和舍外下風(fēng)向的氣載葡萄球菌濃度(P＜0.05或P＜

4、0.01)，但是舍外下風(fēng)不同距離間的葡萄球菌濃度差異并不顯著(P＞0.05)。 第二部分：氣載葡萄球菌的組成、含量及空氣動(dòng)力學(xué)分析本實(shí)驗(yàn)主要對(duì)雞舍內(nèi)氣載葡萄球菌含量及組成進(jìn)行了鑒定。首先通過(guò)革蘭氏染色，初步分離革蘭氏陽(yáng)性菌：其次，革蘭氏陽(yáng)性菌再在Baird-Park瓊脂培養(yǎng)基上進(jìn)行一次純分離培養(yǎng)，然后用API20Steph(BioMerieux，Marcy-I'Etoile，F(xiàn)rance)鑒定，統(tǒng)計(jì)葡萄球菌的數(shù)量，結(jié)果表明雞舍葡

5、萄球菌占需氧活菌總數(shù)分別為8.43％～16.61％；葡萄球菌主要包括金黃色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、腐生葡萄球菌、豬葡萄球菌、木葡萄球菌、頭狀葡萄球菌、科氏葡萄球菌、肉葡萄球菌，其中金黃色葡萄球菌的濃度占葡萄球菌總濃度的24％和27％，其次是表皮葡萄球菌和腐生葡萄球菌。 從葡萄球菌菌在Andersen-6空氣微生物收集器層級(jí)上的分布規(guī)律來(lái)看，主要分布在B～E級(jí)(36.9％)，氣溶膠顆粒直徑在0.2～6μm之間，可以進(jìn)入到人、畜的氣

6、管、支氣管，甚至細(xì)支氣管，對(duì)養(yǎng)殖人員和動(dòng)物呼吸道存在嚴(yán)重危害。 第三部分：REP-PCR對(duì)舍內(nèi)外環(huán)境氣載金黃色葡萄球菌來(lái)源的鑒定本實(shí)驗(yàn)對(duì)雞舍內(nèi)空氣、舍外環(huán)境上風(fēng)10m、50m和下風(fēng)10m、50m、100m、200m、400m不同距離分離的金黃色葡萄球菌，與此同時(shí)，分離糞便中的金黃色葡萄球菌。利用金黃色葡萄球菌DNA基因外重復(fù)一致回文序列聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(RepetitiveExtragenicPalindromicelements

7、，PCR，REP-PCR)鑒定技術(shù)，擴(kuò)增不同測(cè)量點(diǎn)和糞便收集的金黃色葡萄球菌的DNA圖譜。通過(guò)每一個(gè)采樣點(diǎn)的金黃色葡萄球菌的濃度的變化以及金黃色葡萄球菌遺傳相似性分析確認(rèn)動(dòng)物舍微生物氣溶膠向舍外環(huán)境的傳播。 REP-PCR結(jié)果表明，從雞舍的糞便中分離的金黃色葡萄球菌與從舍內(nèi)空氣中分離的部分金黃色葡萄球菌(38.7％)相似性可達(dá)100％，從舍外下風(fēng)方向分離到的多數(shù)金黃色葡萄球菌(55.9％)與舍內(nèi)空氣或糞便中分離的金黃色葡萄球菌相

8、似性可達(dá)100％?？梢?jiàn)，它們分別是由糞便中遺傳基因完全相同的菌株繁殖而來(lái)。而從舍外上風(fēng)分離到的金黃色葡萄球菌與舍內(nèi)空氣或糞便中分離的金黃色葡萄球菌相似性僅在60％-87％之間。結(jié)果顯示，糞便中的金黃色葡萄球菌能夠形成氣溶膠，進(jìn)入氣懸狀態(tài)，不僅能在舍內(nèi)傳播，而且又能夠借助舍內(nèi)外氣體交換，傳播到舍外下風(fēng)一定的距離。從而說(shuō)明，來(lái)自動(dòng)物體的金黃色葡萄球菌既能污染舍內(nèi)空氣，對(duì)本舍畜群構(gòu)成傳染威脅，而且，使病原菌傳播到一定的距離，對(duì)周邊社區(qū)環(huán)境空氣

9、造成生物污染。本研究揭示了微生物氣溶膠的傳播規(guī)律，具有公共衛(wèi)生及流行病學(xué)意義。第四部分：不同季節(jié)畜禽舍環(huán)境中氣載葡萄球菌含量的變化分析本實(shí)驗(yàn)對(duì)和雞舍(封閉式、半封閉式)夏季、秋季、冬季三個(gè)季節(jié)的舍內(nèi)氣載葡萄球菌和金黃色葡萄球菌進(jìn)行了檢測(cè)，并且分析了其濃度的變化。結(jié)果顯示，夏季雞舍內(nèi)夏季雞場(chǎng)合內(nèi)氣載需氧活菌濃度6.8x10～2.32x103CFU/m3，葡萄球菌濃度3.6x10～1.57x103CFU/m3，金黃色葡萄球菌濃度6～4.34

10、×102CFU/m3；秋季雞場(chǎng)舍內(nèi)氣載需氧活菌濃度5.2x10～2.35×103CFU/m3，葡萄球菌濃度9.4×10～1.47x103CFU/m3，金黃色葡萄球菌濃度6～4.24×102CFU/m3：冬季雞場(chǎng)舍內(nèi)氣載需氧活菌濃度6.5×10～2.47×104CFU/m3，葡萄球菌濃度5.8x10～1.76×103CFU/m3，金黃色葡萄球菌濃度8～3.54×102CFU/m3。 氣載葡萄球菌活菌基本趨勢(shì)是冬季大于夏季和秋季。這