大腸桿菌氣溶膠和新甲型H1N1病毒氣溶膠發(fā)生和傳播的鑒定.pdf

1、微生物是動物舍環(huán)境污染的主要因素，動物舍的生物污染可以引起一系列傳染病的流行。近幾年的研究表明，一些氣載病原微生物能夠通過空氣傳播很遠(yuǎn)的距離，造成傳染病的流行。過去對畜禽養(yǎng)殖環(huán)境微生物氣溶膠的傳播主要研究對象是細(xì)菌，是通過舍內(nèi)外環(huán)境中的細(xì)菌濃度的變化以及細(xì)菌耐藥性及某些致病菌含量等來確認(rèn)的。然而，這些方法受到的影響因素很多，難以保證分類的準(zhǔn)確性和科學(xué)性。未能證明舍內(nèi)外環(huán)境分離的微生物氣溶膠的起源及其同源性，沒能獲得充分的證據(jù)證明微生物氣

2、溶膠起源于養(yǎng)殖環(huán)境并向周邊及社區(qū)環(huán)境傳播。近些年，以ERIC-PCR和PFGE（脈沖場凝膠電泳）為代表的分子生物學(xué)細(xì)菌分型技術(shù)得以應(yīng)用，以鑒定不同來源細(xì)菌的同源性，追溯其來源。并且，隨著分子生物學(xué)技術(shù)的不斷變革，對畜禽舍養(yǎng)殖環(huán)境病毒氣溶膠的傳播研究也越來越廣泛。
　　 本研究分別對細(xì)菌和病毒的氣溶膠發(fā)生和傳播做了相關(guān)研究。對細(xì)菌，以大腸桿菌為指示菌，采用Andersen-6級空氣微生物樣品收集器，分別在5個雞場舍內(nèi)空氣、舍外上風(fēng)

3、向 10m，50m和下風(fēng)向 10m，50m，100m,200m,400m的距離處收集空氣樣品，每個動物舍設(shè)三點采樣，每次重復(fù)采集5個樣本。同時采集雞的糞便,分離、鑒定大腸桿菌，計算每一個采樣點大腸桿菌的濃度(CFU·m?3空氣)。然后，對每個雞舍，先采用ERIC-PCR對不同來源（糞便、舍內(nèi)、外不同距離空氣樣品）的大腸桿菌分離株進(jìn)行基因分型，然后對ERIC-PCR相似系數(shù)在90％以上的菌株，再采用脈沖場凝膠電泳（PFGE）技術(shù),進(jìn)行同源

4、性鑒定，準(zhǔn)確確認(rèn)細(xì)菌的來源。根據(jù)每個采樣點大腸桿菌濃度的變化以及在不同采樣點分離的大腸桿菌的遺傳距離，確認(rèn)動物舍內(nèi)微生物氣溶膠的起源及其向舍外環(huán)境傳播。對病毒，分別在山東省德州、濟(jì)寧、萊蕪、臨沂、青島、濰坊、煙臺、東營等地的養(yǎng)豬場的舍內(nèi)和舍外下風(fēng)向10m、20m，用AGI-30采集空氣樣品，每個采樣點重復(fù)采集3個樣品，并采集棉拭子。在泰安市岱岳區(qū)采集豬血樣品，進(jìn)行血凝及血凝抑制試驗，以檢測抗體效價。在山東農(nóng)業(yè)大學(xué)門診及富農(nóng)門診收集病死豬

5、病料、棉拭子、血液進(jìn)行處理。運用熒光定量RT-PCR技術(shù)檢測新型H1N1病毒的含量，探討豬舍中新型H1N1病毒的氣溶膠的傳播。本實驗共分離到118株大腸桿菌。從濃度來看,5個雞場舍內(nèi)空氣中大腸桿菌的濃度為11-56 CFU·m-3空氣，遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于舍外上風(fēng)和舍外下風(fēng)處的大腸桿菌濃度(P<0.05)，顯示了舍內(nèi)微生物氣溶膠不斷產(chǎn)生和集聚；然而，舍外下風(fēng)不同距離間的大腸桿菌濃度差異并不顯著(P>0.05)，顯示來源于雞舍內(nèi)的氣載大腸桿菌能夠傳播

6、到一定了距離。通過ERIC-PCR篩選出來26組大腸桿菌，共82株大腸桿菌同源性高于90％。各組內(nèi)菌株均需要運用脈沖場凝膠電泳技術(shù)進(jìn)行進(jìn)一步基因分型。ERIC-PCR和PFGE兩種方法相結(jié)合進(jìn)行同源性鑒定顯示，從雞的糞便中分離到的大腸桿菌與從舍內(nèi)空氣中分離到的部分大腸桿菌(17.1％)具有相同來源；從雞場舍外下風(fēng)方向(10m，50m，100m,200m)分離到的多數(shù)大腸桿菌(59.1％)與舍內(nèi)空氣或糞便中分離的大腸桿菌來源相同。而從雞舍

7、上風(fēng)分離到的大腸桿菌與舍內(nèi)空氣或糞便中分離的大腸桿菌相似指數(shù)較?。?80％），表明這些細(xì)菌并非來源于該雞舍。舍外下風(fēng)向各采樣點分離的大腸桿菌與上風(fēng)向10m，50m分離得的大腸桿菌同源性較低，排除下風(fēng)向采得的大腸桿菌來自上風(fēng)向的可能。而很多從舍內(nèi)空氣和舍外下風(fēng)方向分離到的大腸桿菌與糞便中的相似指數(shù)較高（＞85％），說明糞便中的細(xì)菌能夠形成氣溶膠，并且通過舍內(nèi)外氣體交換傳播到舍外，依氣象條件傳播到舍外不同的距離。造成周邊環(huán)境的生物污染以及病

8、原微生物的擴(kuò)散，給鄰近的社區(qū)居民形成感染風(fēng)險。
　　 本研究建立了在線檢測新型H1N1病毒的熒光定量RT-PCR方法，本次試驗共對山東省九個地區(qū)40個養(yǎng)豬場，及山東農(nóng)業(yè)大學(xué)門診進(jìn)行了樣品采集，共采集到空氣樣品和棉拭子樣品162份，血液樣品27份。其中，舍外20米的37個樣品均為陰性，舍外十米37個樣品有3個樣品為陽性，濰坊1個，德州2個。本實驗共收集40個豬場157個空氣樣品，其中41個樣品為陽性，陽性率為26％。27份血清樣品