REGγ的生理和病理研究.pdf

1、蛋白酶體是蛋白質降解途徑中的一種重要成分。蛋白酶體降解途徑對于許多細胞進程，包括細胞周期、轉錄調控、細胞信號傳導、細胞凋亡及免疫反應等都是必不可少的。其功能改變將引起蛋白代謝異常，導致細胞功能紊亂。REG是一種蛋白酶體激活因子，它能特異性結合并活化20S蛋白酶體，以ATP和泛素非依賴途徑降解目的蛋白。目前發(fā)現(xiàn)此家族有三個成員：即REGα、REGβ和REGγ。REGγ是由7個28KD的亞基形成的同源七聚體，能激活蛋白酶體的活性。
　

2、　 癌癥是目前人類的頭號殺手，而大腸癌、肺癌及甲狀腺癌是目前癌癥死因的幾種重要類型。癌癥的發(fā)病機理很復雜，但究其原因主要在于細胞周期失控和細胞惡性增長。之前研究顯示：p53是細胞內重要的抑癌基因，它也是細胞增殖、分化和凋亡的一個樞紐，p53突變或者降解都會導致其功能失調，使細胞及其后代的基因組受到嚴重損害，引發(fā)惡性腫瘤。p21是p53下游的靶基因，它和p53共同構成細胞周期GI期的檢查站，DNA損傷后不經(jīng)過修復則無法通過，減少受損DN

3、A的復制和積累，從而發(fā)揮抑癌作用。p21是細胞周期抑制蛋白，可導致細胞生長停滯，促進細胞凋亡，而本實驗室目前研究發(fā)現(xiàn)：REGγ能促進MDM2介導的P53降解，而且REGγ能介導蛋白酶體對p21的降解。由此表明，REGγ與癌癥的發(fā)生發(fā)展密切相關。但是至今為止，REGγ在癌癥發(fā)生發(fā)展中的具體機制還不是非常清楚。因此，本文我們采用9種小鼠組織、兩種人正常組織和三種典型的人類癌癥組織作為研究對象，來探討REGγ在各種正常組織和癌癥組織中的表達和

4、分布情況，并且探究其作用機理。本文的研究能夠為以后癌癥的治療提供理論依據(jù)。
　　 本文主要采用免疫組織化學的方法，對REGγ在9種小鼠組織的表達分布進行系統(tǒng)研究，同時通過比較REGγ在大腸癌、肺癌及甲狀腺癌中和正常人組織中的表達差異，揭示REGγ在大腸癌、肺癌及甲狀腺癌的發(fā)生發(fā)展中的作用。最后，本文還用免疫組化的方法檢測了REGγ+/+和REGγ-/-小鼠組織中p53、p21和MDM2的分布，并和REGγ的表達做相關性分析，初步

5、探索REGγ的作用機理。另外，我們還采用熒光素酶方法，通過體外實驗探討了REGγ可能的作用機制。
　　 結果：發(fā)現(xiàn)，在正常的生理分布方面，REGγ在小鼠的神經(jīng)系統(tǒng)、泌尿系統(tǒng)、消化系統(tǒng)、生殖系統(tǒng)及內分泌系統(tǒng)中均呈現(xiàn)陽性表達。其中神經(jīng)系統(tǒng)和生殖系統(tǒng)陽性表達率最高。特別是小腦的浦肯野細胞和視網(wǎng)膜的神經(jīng)節(jié)細胞中發(fā)現(xiàn)有特異表達。這提示REGγ可能參與細胞的生長及細胞周期的調控。同時，相對于正常癌旁組織，REGγ在大腸癌，肺癌和甲狀腺癌組織

6、中呈現(xiàn)明顯的高表達。所以REGγ可能與腫瘤的發(fā)生發(fā)展相關。在進一步的機理探究中，我們通過比較REGγ+/+和REGγ-/-小鼠中p53、p21、MDM2的表達差異，發(fā)現(xiàn)REGγ能夠減少各種小鼠組織中細胞周期調節(jié)蛋白p53和p21的表達，促進MDM2蛋白的表達。因此我們推測：REGγ對癌癥的作用可能是通過降解p53或p21的降解來實現(xiàn)，其具體機制還需要進一步的探索。抑制人類癌細胞的內源性REGγ蛋白就能夠減少MDM2介導的p53降解，從而