REGγ的生理和病理研究.pdf

1、蛋白酶體是蛋白質(zhì)降解途徑中的一種重要成分。蛋白酶體降解途徑對于許多細(xì)胞進(jìn)程，包括細(xì)胞周期、轉(zhuǎn)錄調(diào)控、細(xì)胞信號傳導(dǎo)、細(xì)胞凋亡及免疫反應(yīng)等都是必不可少的。其功能改變將引起蛋白代謝異常，導(dǎo)致細(xì)胞功能紊亂。REG是一種蛋白酶體激活因子，它能特異性結(jié)合并活化20S蛋白酶體，以ATP和泛素非依賴途徑降解目的蛋白。目前發(fā)現(xiàn)此家族有三個(gè)成員：即REGα、REGβ和REGγ。REGγ是由7個(gè)28KD的亞基形成的同源七聚體，能激活蛋白酶體的活性。
　

2、　 癌癥是目前人類的頭號殺手，而大腸癌、肺癌及甲狀腺癌是目前癌癥死因的幾種重要類型。癌癥的發(fā)病機(jī)理很復(fù)雜，但究其原因主要在于細(xì)胞周期失控和細(xì)胞惡性增長。之前研究顯示：p53是細(xì)胞內(nèi)重要的抑癌基因，它也是細(xì)胞增殖、分化和凋亡的一個(gè)樞紐，p53突變或者降解都會導(dǎo)致其功能失調(diào)，使細(xì)胞及其后代的基因組受到嚴(yán)重?fù)p害，引發(fā)惡性腫瘤。p21是p53下游的靶基因，它和p53共同構(gòu)成細(xì)胞周期GI期的檢查站，DNA損傷后不經(jīng)過修復(fù)則無法通過，減少受損DN

3、A的復(fù)制和積累，從而發(fā)揮抑癌作用。p21是細(xì)胞周期抑制蛋白，可導(dǎo)致細(xì)胞生長停滯，促進(jìn)細(xì)胞凋亡，而本實(shí)驗(yàn)室目前研究發(fā)現(xiàn)：REGγ能促進(jìn)MDM2介導(dǎo)的P53降解，而且REGγ能介導(dǎo)蛋白酶體對p21的降解。由此表明，REGγ與癌癥的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)。但是至今為止，REGγ在癌癥發(fā)生發(fā)展中的具體機(jī)制還不是非常清楚。因此，本文我們采用9種小鼠組織、兩種人正常組織和三種典型的人類癌癥組織作為研究對象，來探討REGγ在各種正常組織和癌癥組織中的表達(dá)和

4、分布情況，并且探究其作用機(jī)理。本文的研究能夠?yàn)橐院蟀┌Y的治療提供理論依據(jù)。
　　 本文主要采用免疫組織化學(xué)的方法，對REGγ在9種小鼠組織的表達(dá)分布進(jìn)行系統(tǒng)研究，同時(shí)通過比較REGγ在大腸癌、肺癌及甲狀腺癌中和正常人組織中的表達(dá)差異，揭示REGγ在大腸癌、肺癌及甲狀腺癌的發(fā)生發(fā)展中的作用。最后，本文還用免疫組化的方法檢測了REGγ+/+和REGγ-/-小鼠組織中p53、p21和MDM2的分布，并和REGγ的表達(dá)做相關(guān)性分析，初步

5、探索REGγ的作用機(jī)理。另外，我們還采用熒光素酶方法，通過體外實(shí)驗(yàn)探討了REGγ可能的作用機(jī)制。
　　 結(jié)果：發(fā)現(xiàn)，在正常的生理分布方面，REGγ在小鼠的神經(jīng)系統(tǒng)、泌尿系統(tǒng)、消化系統(tǒng)、生殖系統(tǒng)及內(nèi)分泌系統(tǒng)中均呈現(xiàn)陽性表達(dá)。其中神經(jīng)系統(tǒng)和生殖系統(tǒng)陽性表達(dá)率最高。特別是小腦的浦肯野細(xì)胞和視網(wǎng)膜的神經(jīng)節(jié)細(xì)胞中發(fā)現(xiàn)有特異表達(dá)。這提示REGγ可能參與細(xì)胞的生長及細(xì)胞周期的調(diào)控。同時(shí)，相對于正常癌旁組織，REGγ在大腸癌，肺癌和甲狀腺癌組織

6、中呈現(xiàn)明顯的高表達(dá)。所以REGγ可能與腫瘤的發(fā)生發(fā)展相關(guān)。在進(jìn)一步的機(jī)理探究中，我們通過比較REGγ+/+和REGγ-/-小鼠中p53、p21、MDM2的表達(dá)差異，發(fā)現(xiàn)REGγ能夠減少各種小鼠組織中細(xì)胞周期調(diào)節(jié)蛋白p53和p21的表達(dá)，促進(jìn)MDM2蛋白的表達(dá)。因此我們推測：REGγ對癌癥的作用可能是通過降解p53或p21的降解來實(shí)現(xiàn)，其具體機(jī)制還需要進(jìn)一步的探索。抑制人類癌細(xì)胞的內(nèi)源性REGγ蛋白就能夠減少M(fèi)DM2介導(dǎo)的p53降解，從而