光學(xué)蛋白質(zhì)芯片檢測(cè)脂聯(lián)素的研究.pdf

1、目的： 橢偏光學(xué)蛋白質(zhì)芯片技術(shù)是將橢偏光生物顯微成像技術(shù)和集成化多元蛋白質(zhì)芯片技術(shù)相結(jié)合，發(fā)展形成的具有無(wú)標(biāo)記、高通量、實(shí)時(shí)檢測(cè)等優(yōu)點(diǎn)的蛋白質(zhì)自動(dòng)分析技術(shù)。本研究通過(guò)摸索芯片制備、探針裝配、生物學(xué)反應(yīng)實(shí)驗(yàn)條件和優(yōu)化實(shí)驗(yàn)方法，制備了脂聯(lián)素檢測(cè)的光學(xué)蛋白質(zhì)芯片，通過(guò)檢測(cè)不同濃度脂聯(lián)素標(biāo)準(zhǔn)品，建立濃度-灰度標(biāo)準(zhǔn)曲線，進(jìn)一步定量檢測(cè)血清脂聯(lián)素濃度，結(jié)果與酶聯(lián)免疫檢測(cè)方法進(jìn)行對(duì)比，初步探索建立光學(xué)蛋白質(zhì)芯片定量檢測(cè)脂聯(lián)素的可行性。此外，血

2、清檢測(cè)脂聯(lián)素標(biāo)本來(lái)自臨床患者，根據(jù)患者的病情分組，對(duì)其相關(guān)臨床意義也進(jìn)行了探討。 方法： 采用橢偏光學(xué)生物顯微成像系統(tǒng)，微流控芯片加樣系統(tǒng)，光學(xué)蛋白質(zhì)芯片分析系統(tǒng)及軟件等。主要實(shí)驗(yàn)材料：?jiǎn)尉Ч杵⒈砻娓男詣?、人脂?lián)素（Adiponectin）及其抗體（Anti-Adiponectin）、酪蛋白、人脂聯(lián)素酶聯(lián)免疫試劑盒和59名糖尿病患者（依據(jù)24小時(shí)尿白蛋白排泄量將患者分為：大量蛋白尿組、微量蛋白尿組、正常蛋白尿組）血清等

3、。切割、清洗及羧基化表面改性硅片后制備脂聯(lián)素檢測(cè)芯片（6×8點(diǎn)芯片）：羧基化硅片表面活化、選擇最佳檢測(cè)探針濃度及裝配檢測(cè)探針（脂聯(lián)素抗體，濃度為200μg/ml）、酪蛋白封閉各檢測(cè)位點(diǎn)、檢測(cè)脂聯(lián)素標(biāo)準(zhǔn)品濃度梯度為（1、5、10、30、60μg/ml），根據(jù)各濃度的灰度成像值，建立濃度-灰度對(duì)應(yīng)關(guān)系的標(biāo)準(zhǔn)曲線，求解對(duì)應(yīng)關(guān)系公式，定量檢測(cè)患者血清脂聯(lián)素水平，結(jié)果與脂聯(lián)素酶聯(lián)免疫試劑盒檢測(cè)結(jié)果對(duì)比分析。采用SPSS13．0軟件進(jìn)行實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)

4、分析，應(yīng)用t檢驗(yàn)等，P<0．05顯示差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 結(jié)果： 實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示：根據(jù)脂聯(lián)素抗體最優(yōu)濃度選擇實(shí)驗(yàn)，確定了檢測(cè)探針的最優(yōu)濃度為200μg/ml，可以較好滿足實(shí)驗(yàn)檢測(cè)要求。脂聯(lián)素標(biāo)準(zhǔn)品檢測(cè)結(jié)果顯示：脂聯(lián)素標(biāo)準(zhǔn)品不同濃度（1、5、10、30、60μg/ml）與各對(duì)應(yīng)檢測(cè)位點(diǎn)灰度值具有濃度灰度的對(duì)數(shù)對(duì)應(yīng)關(guān)系，建立濃度－灰度對(duì)應(yīng)關(guān)系的標(biāo)準(zhǔn)曲線，求解對(duì)應(yīng)關(guān)系公式。檢測(cè)靈敏度達(dá)到1μg/ml，基本可以滿足臨床檢測(cè)的實(shí)用要

5、求。檢測(cè)糖尿病患者血清脂聯(lián)素濃度，并與酶聯(lián)免疫檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行比較，二者差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p>0．05）。血清脂聯(lián)素檢測(cè)結(jié)果顯示，大量蛋白尿組患者血清脂聯(lián)素水平明顯高于正常蛋白尿組（p<0．05），微量蛋白尿組與正常蛋白尿組血清脂聯(lián)素水平無(wú)顯著性差異；血清脂聯(lián)素水平與血尿素氮、血肌酐、尿白蛋白排泄率呈正相關(guān)關(guān)系（p<0．05），血清脂聯(lián)素水平與總膽固醇、甘油三脂、收縮壓、舒張壓無(wú)明顯相關(guān)。 結(jié)論： 1、初步建立了橢偏光學(xué)蛋白