光學(xué)蛋白質(zhì)芯片檢測(cè)心肌標(biāo)志物的研究.pdf

1、 目的：采用橢偏光生物顯微成像技術(shù)發(fā)展起來(lái)的光學(xué)蛋白質(zhì)芯片系統(tǒng)是一種新型超薄膜及表面顯示技術(shù)，是傳統(tǒng)的光學(xué)橢偏技術(shù)與CCD攝像、計(jì)算機(jī)采樣和圖象處理技術(shù)結(jié)合，可以達(dá)到單分子膜層分辨能力，利用生物大分子之間(如，抗原與抗體，受體與配體，酶與底物等)具有特異性結(jié)合的特性，在芯片上裝配生物活性探針，可以用于檢測(cè)蛋白質(zhì)等生物大分子。本研究利用光學(xué)蛋白質(zhì)芯片系統(tǒng)定量檢測(cè)心肌早期標(biāo)志物CRP，探索光學(xué)蛋白質(zhì)芯片在醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)診斷中的應(yīng)用。

2、 方法：實(shí)驗(yàn)采用橢偏光學(xué)生物顯微成像系統(tǒng)、光學(xué)蛋白質(zhì)芯片分析系統(tǒng)及軟件、芯片裝置、微流控芯片加樣系統(tǒng)等。實(shí)驗(yàn)材料包括單晶硅片，人C反應(yīng)蛋白(CRP)，單克隆羊抗人CRP抗體(Anti-CRP)，人免疫球蛋白G(IgG)，多克隆羊抗人IgG抗體(Anti-IgG)，人類血清白蛋白(HSA)，及蛋白A等，PBS緩沖液溶解配制實(shí)驗(yàn)用溶液。切割、清洗及硅烷化硅片后制備蛋白質(zhì)檢測(cè)芯片：裝配蛋白A、裝配檢測(cè)探針(IgG用于檢測(cè)Anti-IgG，A

3、nti-CRP用于檢測(cè)CRP)及HSA封閉檢測(cè)位點(diǎn)。通過(guò)檢測(cè)Anti-IgG建立了在本研究中采用裝配蛋白A進(jìn)行硅片表面改性和HSA封閉檢測(cè)位點(diǎn)的上述制備蛋白質(zhì)檢測(cè)芯片的實(shí)驗(yàn)條件。采用1×6點(diǎn)芯片定量檢測(cè)Anti-IgG(選用濃度為，200、100、50、20、10ng/ml)，采用4×6點(diǎn)芯片定量檢測(cè)CRP(選用濃度為，200、100、50、20、10、5μg/ml)，并分別繪制了檢測(cè)Anti-IgG和CRP的標(biāo)準(zhǔn)曲線。采用SPSS統(tǒng)計(jì)

4、學(xué)軟件(10.0)分析處理實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)。 結(jié)果：檢測(cè)結(jié)果顯示，Anti-IgG濃度與檢測(cè)位點(diǎn)輝度具有高度相關(guān)性，具有濃度-輝度的一致性，可以做出了定量檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)曲線，檢測(cè)靈敏度可以達(dá)到10ng/ml。各濃度(10、20、50、100、200ng/ml)組間變異系數(shù)(c.v.％)分別為：3.08％，1.86％，2.35％，0.83％，2.6％，皮爾遜相關(guān)系數(shù)為97.7％。檢測(cè)CRP結(jié)果顯示，CRP濃度與檢測(cè)位點(diǎn)輝度具有高度相關(guān)性，具有濃

5、度-輝度的一致性，可以做出了定量檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)曲線，檢測(cè)靈敏度為5μg/ml，符合臨床檢測(cè)CRP的靈敏度要求。各濃度(5、10、20、50、100、200μg/ml)的組內(nèi)變異系數(shù)(c.v.％)分別為：2.47％，1.15％，2.06％，4.32％，1.39％，0.36％，皮爾遜相關(guān)系數(shù)為95.3％. 結(jié)論：光學(xué)蛋白質(zhì)芯片可以定量檢測(cè)CRP，靈敏度為5μg/ml，符合臨床檢測(cè)CRP的靈敏度和實(shí)用要求，具有臨床檢測(cè)CRP的潛在應(yīng)用前景。