毛花獼猴桃果實抗壞血酸合成酶相關(guān)基因的克隆及定量表達分析.pdf

1、以毛花獼猴桃（Actinidia eriantha）‘贛獼6號’品種為試材，對其果實發(fā)育期間抗壞血酸（AsA）含量及其合成相關(guān)酶GalLDH與APX含量的動態(tài)變化進行了測定分析。采用改良氯化鋰沉淀法從果實中提取RNA，克隆得到了AsA合成酶GalUR、GME和GMP基因的cDNA全長序列和GPP基因的cDNA序列片段。利用qPCR技術(shù)對供試品種果實發(fā)育過程中AsA合成相關(guān)酶基因GME、GMP、GalUR、GPP、GalLDH、GalDH

2、和GGP的表達特征進行了分析，研究結(jié)果可為解析毛花獼猴桃果實AsA富集的分子機制提供理論依據(jù)。主要研究結(jié)果如下：
　　1.對毛花獼猴桃‘贛獼6號’整個發(fā)育期間果實AsA水平的動態(tài)變化進行了測定與分析，AsA含量在果實發(fā)育前期快速積累，盛花后53d(Days After Full Blossom,DAFB)達到最高值（22.43mg/g），DAFB112d時AsA含量不斷下降至7.65mg/g，此后AsA的形成和降解達到平衡，積累量

3、基本不變，成熟期的AsA含量穩(wěn)定在6.56mg/g。GalLDH酶活性在果實發(fā)育至成熟的過程中始終保持較高的水平，在DAFB53d時活性最強，達到1.95U/g FW。毛花獼猴桃果實發(fā)育后期APX酶活性較高，果實成熟期APX酶活性最強(1.957U/g FW)。
　　2.GalUR、GME與GMP基因的cDNA與其他植物中的該基因分別都有較高的同源性。測序結(jié)果表明克隆得到的GalUR基因cDNA全長為1031bp，共編碼322個氨

4、基酸。該基因與美味獼猴桃（ADB85571.1）中的GalUR1同源性為95％。AsA合成酶GME基因序列長為1139bp，編碼376個氨基酸，與美味獼猴桃（Actinidia deliciosa）及山梨獼猴桃（Actinidia rufa）的GME氨基酸同源性均為98%；GMP序列長為1392bp，編碼361個氨基酸，與闊葉獼猴桃GMP基因氨基酸同源性達97%。
　　3.利用qPCR技術(shù)對毛花獼猴桃‘贛獼6號’果實發(fā)育過程中As

5、A合成相關(guān)酶基因GMP、GME、GGP、GPP、GalDH、GalLDH和GalUR的表達進行了分析。GalUR基因在果實發(fā)育過程中的相對表達量前期先上升后期逐漸下降，與AsA含量變化趨勢一致，表明D-半乳糖醛酸途徑可能存在于毛花獼猴桃的AsA合成中。GME與GMP基因的相對表達量在前期DAFB34d至DAFB53d內(nèi)劇烈上升，隨后逐漸降低。GPP、GalDH、GalLDH基因表達量的趨勢類似，在發(fā)育起始期（DAFB34d）的表達量最大