精子發(fā)生相關(guān)基因的克隆及功能研究.pdf

1、哺乳動(dòng)物的精子發(fā)生是一個(gè)極其復(fù)雜的過(guò)程.在曲精小管中的生精細(xì)胞經(jīng)過(guò)漫長(zhǎng)的分化過(guò)程,最終生成精子.生精過(guò)程中發(fā)生了許多生物學(xué)的變化,如精原細(xì)胞的自我更新,精母細(xì)胞的減數(shù)分裂和精子細(xì)胞的變形.精子發(fā)生是成年睪丸的一項(xiàng)重要的功能,許多在睪丸中特異性和/或高度表達(dá)的基因參與完成這一過(guò)程.為了尋找與精子發(fā)生相關(guān)的基因,我們采用了兩種策略：1.差異顯示PCR 分離曲精小管中的DNA含量為2n和4n的細(xì)胞群,比較兩群細(xì)胞的基因表達(dá)差異,獲取在4n細(xì)胞

2、中特異表達(dá)的表達(dá)序列標(biāo)簽（expressed sequence tags ESTs）.2.人睪丸cDNA微陣列雜交 從人睪丸文庫(kù)中PCR擴(kuò)增插入片段,將PCR產(chǎn)物點(diǎn)膜制備成cDNA微陣列,然后提取胚胎和成人睪丸的mRNA,制備成探針,分別與微陣列進(jìn)行雜交,獲取差異表達(dá)克隆.我們通過(guò)DD-RTPCR和cDNA微陣列差異雜交兩種策略從人睪丸中克隆出四個(gè)與精子發(fā)生相關(guān)的基因.這兩種方法各有優(yōu)缺點(diǎn),DD-RTPCR方法適合小規(guī)模的實(shí)驗(yàn)和小型實(shí)驗(yàn)