精子發(fā)生相關(guān)基因ZNF230基因打靶載體的構(gòu)建及該基因在腫瘤組織中的表達研究.pdf

1、精子發(fā)生是一個多階段，多步驟持續(xù)的細胞分裂和分化過程，它受到性染色體和常染色體上一系列基因的調(diào)控。研究表明：鋅指蛋白基因家族作為哺乳動物最大的基因家族之一，參與了精子發(fā)生和成熟的各個階段的基因表達調(diào)控。精子發(fā)生相關(guān)基因ZNF230屬于鋅指蛋白家族，位于11p15，是我室克隆的一個與人類精子發(fā)生過程相關(guān)的基因。本文圍繞精子發(fā)生相關(guān)基因ZNF230的功能研究，分為兩個部分。 第一部分：構(gòu)建小鼠鋅指蛋白基因Znf230條件性打靶載體，

2、為產(chǎn)生Znf230基因條件性敲除的小鼠模型做好準備工作。設(shè)計和合成特異性引物，經(jīng)PCR從小鼠的基因組中擴增出5’同源臂、3’同源臂及錨定序列，長度分別為4，4，1 kb的片段，反向插入pBS載體的Neo基因的兩側(cè)，從而構(gòu)建小鼠Znf230條件性打靶載體Znf230-pBS(5)。經(jīng)過限制性內(nèi)切酶及DNA測序鑒定，證實該條件性基因打靶載體含有的同源序列與Genebank公布的基因序列一致，表明載體構(gòu)建成功。PCR技術(shù)和定向克隆技術(shù)是構(gòu)建條

3、件基因打靶載體簡單而可靠的方法。運用該技術(shù)獲得了小鼠鋅指蛋白基因Znf230的條件性打靶載體。 第二部分：癌．睪丸抗原(Cancer-testis antigen，CTA)是目前發(fā)展腫瘤免疫治療的理想靶分子，因其在多種腫瘤組織中均有表達，但只在正常人體的睪丸組織表達，其他組織無表達。在這部分工作中我們從蛋白和mRNA水平檢測了ZNF230在不同組織類型的腫瘤中的表達情況，我們發(fā)現(xiàn)該基因在肺癌、肝癌、腎癌、食管癌、胃癌等腫瘤中有不