ER應(yīng)激在卵巢癌順鉑耐藥中的作用研究.pdf

1、目的：
　　 旨在探討內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激在卵巢癌順鉑化療耐藥中的作用及其調(diào)節(jié)的分子機(jī)制，從而探討內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激在卵巢癌順鉑耐藥中的作用，為臨床研發(fā)有效逆轉(zhuǎn)卵巢癌順鉑耐藥的新方法開辟新思路。
　　 方法：
　　 本研究通過(guò)Western免疫印跡法檢測(cè)SKOV3和SKOV3/DDP細(xì)胞中GRP78蛋白的表達(dá)以及不同濃度沙奎那韋作用后SKOV3細(xì)胞GRP78蛋白的表達(dá)。通過(guò)RT-PCR法及Western免疫印跡法檢測(cè)不同藥物對(duì)SK

2、OV3細(xì)胞mTOR、Beclin1 mRNA及蛋白表達(dá)的影響。采用MTT法測(cè)定SKOV3細(xì)胞的順鉑IC50值以及不同劑量沙奎那韋對(duì)卵巢癌SKOV3順鉑敏感性的影響，通過(guò)3-MA抑制細(xì)胞自噬后，觀察其對(duì)SKOV3細(xì)胞順鉑敏感性的影響。
　　 結(jié)果：
　　 1.SKOV3/DDP細(xì)胞中GRP78蛋白表達(dá)量比SKOV3細(xì)胞增高28.58％，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=5.304，P=0.006）。
　　 2.不同濃度沙奎那韋

3、作用SKOV3細(xì)胞后，GRP78蛋白表達(dá)量隨著沙奎那韋濃度的增大逐漸增加。實(shí)驗(yàn)分為4組，沙奎那韋10μmol/l、沙奎那韋20μmol/l、沙奎那韋40μmol/l組與對(duì)照組。其中沙奎那韋10μmol/l、沙奎那韋20μmol/l、沙奎那韋40μmol/l組與對(duì)照組相比，GRP78蛋白分別增高了23.48％、35.39％、41.46％，各實(shí)驗(yàn)組GRP78蛋白表達(dá)量不同，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F=136.791，P=0.000），所有組間的表達(dá)差

4、異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。
　　 3.沙奎那韋可以降低SKOV3細(xì)胞對(duì)順鉑的敏感性。SKOV3細(xì)胞順鉑IC50值為5.49μg/ml，沙奎那韋10μmol/l、20μmol/l作用后，順鉑IC50值為11.199μg/ml、14.906μg/ml，敏感性分別降低了1.04倍、1.72倍。
　　 4.實(shí)驗(yàn)分為對(duì)照組、沙奎那韋組、LY294002組、DDP組、沙奎那韋+DDP組，mTOR mRNA在SKOV3細(xì)胞中的表

5、達(dá)量依次為沙奎那韋+DDP組＞沙奎那韋組＞LY294002組＞DDP組＞對(duì)照組。mTOR mRNA在各實(shí)驗(yàn)組間的表達(dá)量不同，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F=613.061，P=0.000）。Beclin1 mRNA在SKOV3細(xì)胞中的表達(dá)量依次為沙奎那韋+DDP組＞沙奎那韋組＞LY294002組＞DDP組＞對(duì)照組。Beclin1 mRNA在各實(shí)驗(yàn)組間的表達(dá)量不同，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=4002.353，P=0.000)。
　　 5.實(shí)驗(yàn)分為對(duì)照組

6、、沙奎那韋組、LY294002組、DDP組、沙奎那韋+DDP組，mTOR蛋白在SKOV3細(xì)胞中的表達(dá)量依次為沙奎那韋+DDP組＞沙奎那韋組＞LY294002組＞DDP組＞對(duì)照組。mTOR蛋白在各實(shí)驗(yàn)組間的表達(dá)量不同，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F=42.959，P=0.000）。Beclin1蛋白在SKOV3細(xì)胞中的表達(dá)量依次為沙奎那韋+DDP組＞沙奎那韋組＞LY294002組＞DDP組＞對(duì)照組。Beclin1蛋白在各實(shí)驗(yàn)組間的表達(dá)量不同，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意

7、義(F=105.629，P=0.000)。
　　 6.3-MA作用于細(xì)胞后，沙奎那韋對(duì)SKOV3細(xì)胞順鉑敏感性增強(qiáng)。3-MA抑制細(xì)胞自噬后，沙奎那韋10μmol/l、20μmol/l組順鉑IC50值為6.6236μg/ml、7.8884μg/ml。
　　 結(jié)論：
　　 1、誘導(dǎo)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激可導(dǎo)致卵巢癌SKOV3順鉑敏感性下降。
　　 2、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激可能通過(guò)mTOR、Beclin1途徑上調(diào)細(xì)胞自噬、進(jìn)而導(dǎo)致細(xì)