RNA干擾EGFR基因?qū)β殉舶╉樸K耐藥細胞凋亡的影響.pdf

1、RNA干擾EGFR基因?qū)β殉舶╉樸K耐藥細胞凋亡的影響摘要目的應用RNA干擾技術(shù)研究重組質(zhì)粒pEGFR—shRNA對卵巢癌耐藥細胞SKOV3／DDP中EGFR基因表達水平的抑制情況，探討重組質(zhì)粒作用于卵巢癌耐藥細胞SKOV3／DDP后對細胞凋亡的影響。方法構(gòu)建攜帶EGFR小發(fā)夾干擾RNA(pEGFR—shRNA)的重組質(zhì)粒表達載體，將其轉(zhuǎn)染SKOV3／DDP細胞。用逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(RTPCR)和免疫細胞化學法(ICC)檢測轉(zhuǎn)染前后細胞

2、內(nèi)EGFRmRNA和蛋白的表達，流式細胞儀(FCM)分析細胞周期和凋亡率。結(jié)果DNA測序證實EGFR質(zhì)粒農(nóng)達載體中shRNA插入序列完全正確。特異性轉(zhuǎn)染后的細胞EGFRmRNA的表達明顯受抑制。蛋白質(zhì)的表達水平顯著降低。流式細胞儀檢測結(jié)果濕示：順鉑作用后，特異性轉(zhuǎn)染組細胞周期分布發(fā)生明顯改變，G。／G，期細胞比例增多，S期細胞比例減少。凋亡率顯著升高。結(jié)論利用RNA十擾技術(shù)設計并體外合成靶向EGFR的序列特異性shRNA轉(zhuǎn)染人卵巢癰細胞