檢測NDV誘導特異性IFN-γ、IL-4的ELISPOT試驗方法建立及應用.pdf

1、在病毒免疫過程中，不僅需要體液免疫，而且需要細胞免疫。如在新城疫的免疫方面，細胞免疫與體液免疫協(xié)同發(fā)揮作用。Ghumman(1976)等發(fā)現(xiàn)，接種新城疫活苗和滅活苗后2-3天，就能檢測到淋巴細胞內DNA合成增加。Agrawal(1991)等用白細胞游走抑制試驗來評價接種ND疫苗后細胞免疫反應，發(fā)現(xiàn)接種后確實存在細胞免疫反應。機體針對新城疫的細胞免疫和體液免疫之間究竟是怎么變化的呢?為什么經常出現(xiàn)免疫失敗呢?這些問題沒有明確的答案。

2、 酶聯(lián)免疫斑點檢測技術(ELISPOT)結合了細胞培養(yǎng)技術與酶聯(lián)免疫吸附技術(ELISA)的長處，能夠分析經特異抗原活化后分泌細胞因子(如IFN-γ、TNF-α等)的單個效應細胞的頻數(shù)，具有敏感、特異、易于重復的優(yōu)點。本研究將ELISPOT技術應用于新城疫細胞免疫的研究，通過對脾淋巴細胞濃度，培養(yǎng)時間，抗原刺激量進行選擇，建立了檢測NDV誘導特異性IFN-γ、IL-4的ELISPOT方法。結果顯示，試驗的特異性與培養(yǎng)時間和刺激抗原密切

3、相關，在一定范圍內，培養(yǎng)時間越長、刺激抗原越多，試驗的特異性越低，當抗原量為5ug/孔，培養(yǎng)時間為7h時，試驗的特異性最強。ELISPOT斑點數(shù)，隨細胞濃度的增加而增加，當小鼠的脾淋巴細胞濃度為106/孔時，最有利于斑點的計數(shù)，試驗誤差最小。用建立的ELISPOT方法對NDV免疫小鼠的IFN-γ、Il-4水平進行檢測發(fā)現(xiàn)，IFN-γ、Il-4與血清抗體的產生存在著一定的時差關系，在血清抗體陽性檢出的前期，IFN-γ的分泌降至最低水平，I