食物過(guò)敏原特異性IgE檢測(cè)方法的建立及臨床應(yīng)用的研究.pdf

1、目的:研制一種能同時(shí)檢測(cè)多種食物過(guò)敏原特異性IgE的檢測(cè)條，并探討其在過(guò)敏性疾病診斷中的應(yīng)用價(jià)值，為臨床提供一種高效實(shí)用的過(guò)敏原特異性IgE檢測(cè)的新技術(shù)。 方法: 1．制備蛋白、牛奶、小麥、花生、黃豆、腰果、蟹、蝦等八種常見(jiàn)食物過(guò)敏原的提取液，測(cè)定提取液的蛋白質(zhì)濃度并進(jìn)行濃縮處理及SDS-PAGE分析。 2．選用硝酸纖維素膜（NC膜）作為固相載體，對(duì)過(guò)敏原的包被條件和檢測(cè)條件進(jìn)行優(yōu)化。選用患者陽(yáng)性血清進(jìn)行檢測(cè)，正

2、常人血清及胎牛血清作為陰性對(duì)照，選擇陽(yáng)性血清顯色清晰且正常人血清及胎牛血清背景干凈的組合條件作為最佳制備條件和檢測(cè)條件。 3．根據(jù)優(yōu)化結(jié)果制備可同時(shí)檢測(cè)八種過(guò)敏原的檢測(cè)條，并對(duì)檢測(cè)條的靈敏性、重復(fù)性和穩(wěn)定性進(jìn)行檢測(cè)。 4．將研制的檢測(cè)條按照優(yōu)化結(jié)果對(duì)210份患者血清和30份正常人血清進(jìn)行檢測(cè)，并與Allergyscreen過(guò)敏原檢測(cè)系統(tǒng)的檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行對(duì)比分析。 結(jié)果:以硝酸纖維素膜（NC膜）作為固相載體，八種食物

3、過(guò)敏原除點(diǎn)樣濃度有不同外，其它制備條件和檢測(cè)條件均相同。八種過(guò)敏原的最佳點(diǎn)樣濃度分別為：蛋白0．25mg/ml、牛奶1mg/ml、小麥1mg/ml、花生1mg/ml、黃豆1mg/ml、腰果1mg/ml、蟹0．25mg/ml、蝦0．25mg/ml。檢測(cè)條制備和檢測(cè)的最佳條件與過(guò)程為：以NC膜為固相載體，按照每種過(guò)敏原的最佳點(diǎn)樣濃度點(diǎn)樣一次，室溫下包被2小時(shí)，2%PVA室溫下封閉1小時(shí)，待檢血清1：10稀釋?zhuān)c檢測(cè)條在搖床上室溫下反應(yīng)2小時(shí)

4、，洗膜，加入濃度為2μg/ml的堿性磷酸酶（AP）標(biāo)記的抗人IgE單克隆抗體，與檢測(cè)條在搖床上室溫下反應(yīng)半小時(shí)，洗膜，最后加入BCIP/NBT底物，避光反應(yīng)約十分鐘，洗膜，完全干燥后判定檢測(cè)的結(jié)果。檢測(cè)條的靈敏性、重復(fù)性和穩(wěn)定性好。與Allergyscreen過(guò)敏原檢測(cè)系統(tǒng)的檢測(cè)結(jié)果相比，兩種方法對(duì)雞蛋白、牛奶、花生、黃豆、螃蟹、蝦等大多數(shù)過(guò)敏原的檢出率無(wú)差異（P>0．05），對(duì)小麥和腰果的檢出率有差異（P<0．05）。兩種方法的陽(yáng)性結(jié)